河南农业科学
河南農業科學
하남농업과학
JOURNAL OF HENAN AGRICULTURAL SCIENCES
2015年
2期
115-118
,共4页
任聪%黄五星%张翔%邵惠芳%许自成
任聰%黃五星%張翔%邵惠芳%許自成
임총%황오성%장상%소혜방%허자성
羊蹄%GAPDH基因%克隆
羊蹄%GAPDH基因%剋隆
양제%GAPDH기인%극륭
Rumex japonicus Houtt.%GAPDH gene%cloning
为利用实时荧光定量PCR技术研究中草药羊蹄有效化学成分合成相关基因表达情况,采用针对多糖、多酚植物样品的总RNA提取试剂提取高质量的羊蹄总RNA,随后运用反转录PCR方法克隆了羊蹄甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因的部分cDNA序列,并以该序列为模板设计引物,采用实时荧光定量PCR验证其作为内源参照基因的可靠性.结果表明:获得的核酸序列长564 bp,编码188个氨基酸;推导的氨基酸序列与西伯利亚蓼、拟南芥、小麦GAPDH基因编码的氨基酸序列同源性分别为92％、90％和89％;扩增曲线和熔解曲线显示设计的引物可应用于实时荧光定量PCR扩增.羊蹄GAPDH基因的克隆为利用实时荧光定量PCR技术研究目的基因表达情况奠定了基础.
為利用實時熒光定量PCR技術研究中草藥羊蹄有效化學成分閤成相關基因錶達情況,採用針對多糖、多酚植物樣品的總RNA提取試劑提取高質量的羊蹄總RNA,隨後運用反轉錄PCR方法剋隆瞭羊蹄甘油醛-3-燐痠脫氫酶(GAPDH)基因的部分cDNA序列,併以該序列為模闆設計引物,採用實時熒光定量PCR驗證其作為內源參照基因的可靠性.結果錶明:穫得的覈痠序列長564 bp,編碼188箇氨基痠;推導的氨基痠序列與西伯利亞蓼、擬南芥、小麥GAPDH基因編碼的氨基痠序列同源性分彆為92％、90％和89％;擴增麯線和鎔解麯線顯示設計的引物可應用于實時熒光定量PCR擴增.羊蹄GAPDH基因的剋隆為利用實時熒光定量PCR技術研究目的基因錶達情況奠定瞭基礎.
위이용실시형광정량PCR기술연구중초약양제유효화학성분합성상관기인표체정황,채용침대다당、다분식물양품적총RNA제취시제제취고질량적양제총RNA,수후운용반전록PCR방법극륭료양제감유철-3-린산탈경매(GAPDH)기인적부분cDNA서렬,병이해서렬위모판설계인물,채용실시형광정량PCR험증기작위내원삼조기인적가고성.결과표명:획득적핵산서렬장564 bp,편마188개안기산;추도적안기산서렬여서백리아료、의남개、소맥GAPDH기인편마적안기산서렬동원성분별위92％、90％화89％;확증곡선화용해곡선현시설계적인물가응용우실시형광정량PCR확증.양제GAPDH기인적극륭위이용실시형광정량PCR기술연구목적기인표체정황전정료기출.
