浙江大学学报（农业与生命科学版）
浙江大學學報（農業與生命科學版）
절강대학학보（농업여생명과학판）
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY(AGRICULTURE & LIFE SCIENCES)
2015年
1期
25-33
,共9页
麻文建%郑磊%张静%刘洋%朱天辉
痳文建%鄭磊%張靜%劉洋%硃天輝
마문건%정뢰%장정%류양%주천휘
粟疫菌%随机扩增多态性DNA技术%序列特异扩增区域%巢式PCR%分子检测
粟疫菌%隨機擴增多態性DNA技術%序列特異擴增區域%巢式PCR%分子檢測
속역균%수궤확증다태성DNA기술%서렬특이확증구역%소식PCR%분자검측
Cryphonectria parasitica%random amplified polymorphic DNA (RAPD)%sequence characterized amplified region (SCAR)%nested-PCR%molecular detection
为建立栗疫菌(Cryphonectria parasitica)快速、准确的检测技术,利用随机扩增多态性DNA技术(random amplified polymorphic DNA,RAPD)对不同来源地的栗疫菌和其他真菌分离物进行PCR扩增,筛选出栗疫菌的RAPD特异片段SCQ494.将特异RAPD片段SCQ494进行分离、回收,与载体pMD@19-T载体连接,转化至大肠埃希菌进行培养,对目标片段克隆测序.根据测序结果,用Primer 5.0软件设计了序列特异扩增区域(sequence characterized amplified region,SCAR)引物CQ1/CQ2和巢式PCR引物CR1/CR2.利用引物CQ1/CQ2通过常规PCR对不同来源地供试栗疫菌可扩增出1条约1 420 bp的条带,对其他供试菌株DNA的PCR产物均无此条带,检测灵敏度为3 pg/μL的基因组DNA;而以引物CQ1/CQ2为外圈引物和引物CR1/CR2为内圈引物进行的巢式PCR可从栗疫菌基因组DNA中扩增出1条大小约875 bp的条带,灵敏度达到30 fg/tμL,是常规PCR的1000倍.验证实验表明巢式PCR可以从发病程度不同的栗树枝干和在自然感染的栗树枝条中检测出栗疫菌.
為建立慄疫菌(Cryphonectria parasitica)快速、準確的檢測技術,利用隨機擴增多態性DNA技術(random amplified polymorphic DNA,RAPD)對不同來源地的慄疫菌和其他真菌分離物進行PCR擴增,篩選齣慄疫菌的RAPD特異片段SCQ494.將特異RAPD片段SCQ494進行分離、迴收,與載體pMD@19-T載體連接,轉化至大腸埃希菌進行培養,對目標片段剋隆測序.根據測序結果,用Primer 5.0軟件設計瞭序列特異擴增區域(sequence characterized amplified region,SCAR)引物CQ1/CQ2和巢式PCR引物CR1/CR2.利用引物CQ1/CQ2通過常規PCR對不同來源地供試慄疫菌可擴增齣1條約1 420 bp的條帶,對其他供試菌株DNA的PCR產物均無此條帶,檢測靈敏度為3 pg/μL的基因組DNA;而以引物CQ1/CQ2為外圈引物和引物CR1/CR2為內圈引物進行的巢式PCR可從慄疫菌基因組DNA中擴增齣1條大小約875 bp的條帶,靈敏度達到30 fg/tμL,是常規PCR的1000倍.驗證實驗錶明巢式PCR可以從髮病程度不同的慄樹枝榦和在自然感染的慄樹枝條中檢測齣慄疫菌.
위건립률역균(Cryphonectria parasitica)쾌속、준학적검측기술,이용수궤확증다태성DNA기술(random amplified polymorphic DNA,RAPD)대불동래원지적률역균화기타진균분리물진행PCR확증,사선출률역균적RAPD특이편단SCQ494.장특이RAPD편단SCQ494진행분리、회수,여재체pMD@19-T재체련접,전화지대장애희균진행배양,대목표편단극륭측서.근거측서결과,용Primer 5.0연건설계료서렬특이확증구역(sequence characterized amplified region,SCAR)인물CQ1/CQ2화소식PCR인물CR1/CR2.이용인물CQ1/CQ2통과상규PCR대불동래원지공시률역균가확증출1조약1 420 bp적조대,대기타공시균주DNA적PCR산물균무차조대,검측령민도위3 pg/μL적기인조DNA;이이인물CQ1/CQ2위외권인물화인물CR1/CR2위내권인물진행적소식PCR가종률역균기인조DNA중확증출1조대소약875 bp적조대,령민도체도30 fg/tμL,시상규PCR적1000배.험증실험표명소식PCR가이종발병정도불동적률수지간화재자연감염적률수지조중검측출률역균.
