徐州医学院学报
徐州醫學院學報
서주의학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE XUZHOU
2014年
12期
871-873
,共3页
SIRT6%硝基化位点突变体%真核表达
SIRT6%硝基化位點突變體%真覈錶達
SIRT6%초기화위점돌변체%진핵표체
SIRT6%mutants at nitrated sites%eukaryotic expression
目的 构建人类SIRT6蛋白硝基化位点突变体,用于其活性调节机制的研究.方法 以野生型pCD-NA3.1-SIRT6-FLAG真核表达重组体为模板,用定点突变PCR的方法获得SIRT6的酪氨酸突变体;突变产物转化大肠杆菌DH5α进行筛选、序列测定;野生型和突变型重组体转到293H细胞,Western blot鉴定SIRT6的表达.结果 ①经PCR法得到了SIRT6的突变重组体;②SIRT6突变重组体测序图谱与预期结果完全一致;③Western blot检测野生和突变型SIRT6蛋白能表达.结论 获得了能真核表达硝基化位点的突变型SIRT6蛋白的重组体.
目的 構建人類SIRT6蛋白硝基化位點突變體,用于其活性調節機製的研究.方法 以野生型pCD-NA3.1-SIRT6-FLAG真覈錶達重組體為模闆,用定點突變PCR的方法穫得SIRT6的酪氨痠突變體;突變產物轉化大腸桿菌DH5α進行篩選、序列測定;野生型和突變型重組體轉到293H細胞,Western blot鑒定SIRT6的錶達.結果 ①經PCR法得到瞭SIRT6的突變重組體;②SIRT6突變重組體測序圖譜與預期結果完全一緻;③Western blot檢測野生和突變型SIRT6蛋白能錶達.結論 穫得瞭能真覈錶達硝基化位點的突變型SIRT6蛋白的重組體.
목적 구건인류SIRT6단백초기화위점돌변체,용우기활성조절궤제적연구.방법 이야생형pCD-NA3.1-SIRT6-FLAG진핵표체중조체위모판,용정점돌변PCR적방법획득SIRT6적락안산돌변체;돌변산물전화대장간균DH5α진행사선、서렬측정;야생형화돌변형중조체전도293H세포,Western blot감정SIRT6적표체.결과 ①경PCR법득도료SIRT6적돌변중조체;②SIRT6돌변중조체측서도보여예기결과완전일치;③Western blot검측야생화돌변형SIRT6단백능표체.결론 획득료능진핵표체초기화위점적돌변형SIRT6단백적중조체.
