家畜生态学报
傢畜生態學報
가축생태학보
ACTA ECOLOGAE ANIMALIS DOMASTICI
2015年
2期
61-66
,共6页
王坤%张佰忠%易康乐%蒋隽%王庆桥%李昊帮%燕海峰
王坤%張佰忠%易康樂%蔣雋%王慶橋%李昊幫%燕海峰
왕곤%장백충%역강악%장준%왕경교%리호방%연해봉
鸡%X期BCs%原代培养%贴壁性
鷄%X期BCs%原代培養%貼壁性
계%X기BCs%원대배양%첩벽성
chicken%blastodermal cells (BCs) at stage X%primary cell culture%cell adherent rate
试验从鸡第X期胚胎中分离囊胚,使用合10％ FBS、青霉素和链霉素的高糖DMEM培养基,对鸡X期BCs进行无饲养层培养.分别在6h、12h、24 h对细胞贴壁性进行评价,探究分离方法、离散程度、培养细胞密度、离心损伤对细胞培养的影响.结果表明:滤纸环法在分离胚胎上效果最好;细胞离散程度上,吹打20下效果最好,与吹打30下差异不显著(P＞0.05),二者与吹打40下差异均显著(P＜0.05);接种密度上,1×103个/mL和5×103个/mL两组差异不显著(P＞0.05),这两组与其它组,以及其它组之间差异均显著(P＜0.05),密度为1×105个/mL时效果最好,5×104个/mL次之,但密度为5×104个/mL时更方便观察;离心处理上,都离心5 min的条件下,5 590×g和1 398×g组差异不显著(P＞0.05),但其与224×g处理组差异显著(P＜0.05),其中5 590×g组效果最佳.因此,滤纸环法分离胚胎,吹打20下离散细胞,使用5 590×g离心5 min,稀释成5×104个/mL的密度,接种到96孔板培养,可以获得较好的结果.
試驗從鷄第X期胚胎中分離囊胚,使用閤10％ FBS、青黴素和鏈黴素的高糖DMEM培養基,對鷄X期BCs進行無飼養層培養.分彆在6h、12h、24 h對細胞貼壁性進行評價,探究分離方法、離散程度、培養細胞密度、離心損傷對細胞培養的影響.結果錶明:濾紙環法在分離胚胎上效果最好;細胞離散程度上,吹打20下效果最好,與吹打30下差異不顯著(P＞0.05),二者與吹打40下差異均顯著(P＜0.05);接種密度上,1×103箇/mL和5×103箇/mL兩組差異不顯著(P＞0.05),這兩組與其它組,以及其它組之間差異均顯著(P＜0.05),密度為1×105箇/mL時效果最好,5×104箇/mL次之,但密度為5×104箇/mL時更方便觀察;離心處理上,都離心5 min的條件下,5 590×g和1 398×g組差異不顯著(P＞0.05),但其與224×g處理組差異顯著(P＜0.05),其中5 590×g組效果最佳.因此,濾紙環法分離胚胎,吹打20下離散細胞,使用5 590×g離心5 min,稀釋成5×104箇/mL的密度,接種到96孔闆培養,可以穫得較好的結果.
시험종계제X기배태중분리낭배,사용합10％ FBS、청매소화련매소적고당DMEM배양기,대계X기BCs진행무사양층배양.분별재6h、12h、24 h대세포첩벽성진행평개,탐구분리방법、리산정도、배양세포밀도、리심손상대세포배양적영향.결과표명:려지배법재분리배태상효과최호;세포리산정도상,취타20하효과최호,여취타30하차이불현저(P＞0.05),이자여취타40하차이균현저(P＜0.05);접충밀도상,1×103개/mL화5×103개/mL량조차이불현저(P＞0.05),저량조여기타조,이급기타조지간차이균현저(P＜0.05),밀도위1×105개/mL시효과최호,5×104개/mL차지,단밀도위5×104개/mL시경방편관찰;리심처리상,도리심5 min적조건하,5 590×g화1 398×g조차이불현저(P＞0.05),단기여224×g처리조차이현저(P＜0.05),기중5 590×g조효과최가.인차,려지배법분리배태,취타20하리산세포,사용5 590×g리심5 min,희석성5×104개/mL적밀도,접충도96공판배양,가이획득교호적결과.
