CAJ | 학술논문

边界病病毒(Border disease virus,BDV)是导致绵羊和山羊繁殖障碍的重要病原.为了建立检测BDV特异抗体的ELISA方法,本研究将BDV基因克隆入原核表达载体pET-32a(+),并构建重组表达菌,经SDS-PAGE和Western blot鉴定目的蛋白质.以纯化的重组表达蛋白质为抗原,建立间接ELISA(rE2-ELISA)检测方法.通过反应条件优化,确定抗原包被浓度4.0 μg/ml;封闭液为20 g/L BSA;血清最佳稀释度为1∶50,孵育1h;二抗最佳稀释倍数为1∶30 000,作用45 min;以TMB为底物显色10 min.用该ELISA方法检测瘟病毒属的CSFV、BVDV阳性血清,结果均为阴性.对187份山羊血清样品进行临床检测,与Svanova试剂盒检测结果阳性符合率为76.25％, 总符合率为74.87％;上述检测方法同时与Western blot鉴定结果进行比较,结果显示,Western blot结果与rE2-ELISA检测结果的符合率为79.55％,高于与Svanova试剂盒检测的符合率(72.73％).表明建立的间接ELISA检测方法可适用于临床BDV血清样品的抗体检测.
변계병병독(Border disease virus,BDV)시도치면양화산양번식장애적중요병원.위료건립검측BDV특이항체적ELISA방법,본연구장BDV기인극륭입원핵표체재체pET-32a(+),병구건중조표체균,경SDS-PAGE화Western blot감정목적단백질.이순화적중조표체단백질위항원,건립간접ELISA(rE2-ELISA)검측방법.통과반응조건우화,학정항원포피농도4.0 μg/ml;봉폐액위20 g/L BSA;혈청최가희석도위1∶50,부육1h;이항최가희석배수위1∶30 000,작용45 min;이TMB위저물현색10 min.용해ELISA방법검측온병독속적CSFV、BVDV양성혈청,결과균위음성.대187빈산양혈청양품진행림상검측,여Svanova시제합검측결과양성부합솔위76.25％, 총부합솔위74.87％;상술검측방법동시여Western blot감정결과진행비교,결과현시,Western blot결과여rE2-ELISA검측결과적부합솔위79.55％,고우여Svanova시제합검측적부합솔(72.73％).표명건립적간접ELISA검측방법가괄용우림상BDV혈청양품적항체검측.