西南农业学报
西南農業學報
서남농업학보
SOUTHWEST CHINA JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2015年
1期
381-385
,共5页
基因%克隆%重组细胞株%细胞色素P4503A46%代谢活性
基因%剋隆%重組細胞株%細胞色素P4503A46%代謝活性
기인%극륭%중조세포주%세포색소P4503A46%대사활성
Cene%Clone%CytochromeP4503A46%Metabolic activity
为了克隆巴马小型猪细胞色素P4503A46基因,建立P4503A46稳定表达肝癌细胞株(HepG2-P4503A46),并探究其药物代谢活性,通过RT-PCR从肝组织中钓取基因P4503 A46,将基因与真核表达载体pcDNA3.1连接并转染HepG2细胞,经G418筛选10代,获得稳定表达重组细胞株HepG2-P4503A46,以P4503A特异性代谢底物硝苯地平(NF)探针药物,将探针药物与重组细胞在优化的细胞浓度、药物浓度、孵育时间等条件下进行体外孵育,通过高效液相色谱仪检测其药物代谢(抑制)动力学参数,并将对照组进行比较分析.结果表明,本研究成功从人Bama小型猪肝组织克隆了P4503A46基因,并通过G418筛选,成功建立了细胞稳定表达株,其硝苯地平代谢活性显著高于阴性对照组(P＜0.01);因此,成功克隆、并建立了小型猪P4503A46的稳定表达细胞株(HepG2-P4503 A46),该细胞株具有显著的硝苯地平代谢活性.
為瞭剋隆巴馬小型豬細胞色素P4503A46基因,建立P4503A46穩定錶達肝癌細胞株(HepG2-P4503A46),併探究其藥物代謝活性,通過RT-PCR從肝組織中釣取基因P4503 A46,將基因與真覈錶達載體pcDNA3.1連接併轉染HepG2細胞,經G418篩選10代,穫得穩定錶達重組細胞株HepG2-P4503A46,以P4503A特異性代謝底物硝苯地平(NF)探針藥物,將探針藥物與重組細胞在優化的細胞濃度、藥物濃度、孵育時間等條件下進行體外孵育,通過高效液相色譜儀檢測其藥物代謝(抑製)動力學參數,併將對照組進行比較分析.結果錶明,本研究成功從人Bama小型豬肝組織剋隆瞭P4503A46基因,併通過G418篩選,成功建立瞭細胞穩定錶達株,其硝苯地平代謝活性顯著高于陰性對照組(P＜0.01);因此,成功剋隆、併建立瞭小型豬P4503A46的穩定錶達細胞株(HepG2-P4503 A46),該細胞株具有顯著的硝苯地平代謝活性.
위료극륭파마소형저세포색소P4503A46기인,건립P4503A46은정표체간암세포주(HepG2-P4503A46),병탐구기약물대사활성,통과RT-PCR종간조직중조취기인P4503 A46,장기인여진핵표체재체pcDNA3.1련접병전염HepG2세포,경G418사선10대,획득은정표체중조세포주HepG2-P4503A46,이P4503A특이성대사저물초분지평(NF)탐침약물,장탐침약물여중조세포재우화적세포농도、약물농도、부육시간등조건하진행체외부육,통과고효액상색보의검측기약물대사(억제)동역학삼수,병장대조조진행비교분석.결과표명,본연구성공종인Bama소형저간조직극륭료P4503A46기인,병통과G418사선,성공건립료세포은정표체주,기초분지평대사활성현저고우음성대조조(P＜0.01);인차,성공극륭、병건립료소형저P4503A46적은정표체세포주(HepG2-P4503 A46),해세포주구유현저적초분지평대사활성.
