CAJ | 학술논문

目的:建立近交系五指山小型猪(inbreed line miniature pig of Wuzhishan,ILMW)骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BM-MSCs)体外分离培养和鉴定方法,比较我国不同种系猪来源BM-MSCs的生物学特性,为下一步研究BM-MSC对ILMW单侧输尿管梗阻所致肾损伤的修复机制提供细胞来源.方法:选取4月龄及10月龄健康ILMW各4头,从距髂骨翼边缘1 cm处穿刺,抽出骨髓约5 mL;经密度梯度法分离单个核细胞,分别用含10％,12％和15％胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的完全培养基于体外培养;并取第1代、第3代、第5代、第11代细胞分别行细胞形态学、表型、分化能力、生长曲线、细胞周期等检测.结果:分离培养的BM-MSCs在体外贴壁,呈成纤维样或旋涡状生长;原代细胞18h出现贴壁,第6天进入对数增长期,约9d后80％融合,传代后细胞状态未出现明显异常.细胞表面抗原检测显示CD29,CD44,CD90表达呈阳性;CD34和CD45表达呈阴性;且各代间差异无统计学意义(均P＞0.05).成骨诱导18d后,茜素红染色阳性;成软骨诱导21 d后,阿利新蓝染色阳性.细胞周期检测显示G0/G1的细胞百分比约为81.45％.结论:ILMW的BM-MSCs贴壁时间早,细胞增殖活跃,传代周期短,传代后仍能保持稳定的生物学特性,是中国大陆地区猪来源BM-MSC的最佳选择之一.
목적:건립근교계오지산소형저(inbreed line miniature pig of Wuzhishan,ILMW)골수간충질간세포(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BM-MSCs)체외분리배양화감정방법,비교아국불동충계저래원BM-MSCs적생물학특성,위하일보연구BM-MSC대ILMW단측수뇨관경조소치신손상적수복궤제제공세포래원.방법:선취4월령급10월령건강ILMW각4두,종거가골익변연1 cm처천자,추출골수약5 mL;경밀도제도법분리단개핵세포,분별용함10％,12％화15％태우혈청(fetal bovine serum,FBS)적완전배양기우체외배양;병취제1대、제3대、제5대、제11대세포분별행세포형태학、표형、분화능력、생장곡선、세포주기등검측.결과:분리배양적BM-MSCs재체외첩벽,정성섬유양혹선와상생장;원대세포18h출현첩벽,제6천진입대수증장기,약9d후80％융합,전대후세포상태미출현명현이상.세포표면항원검측현시CD29,CD44,CD90표체정양성;CD34화CD45표체정음성;차각대간차이무통계학의의(균P＞0.05).성골유도18d후,천소홍염색양성;성연골유도21 d후,아리신람염색양성.세포주기검측현시G0/G1적세포백분비약위81.45％.결론:ILMW적BM-MSCs첩벽시간조,세포증식활약,전대주기단,전대후잉능보지은정적생물학특성,시중국대륙지구저래원BM-MSC적최가선택지일.