北京农学院学报
北京農學院學報
북경농학원학보
JOURNAL OF BEIJING AGRICULTURAL COLLEGE
2015年
2期
5-9
,共5页
陈昱圻%郝少东%王合%陶万强%张志勇%王进忠
陳昱圻%郝少東%王閤%陶萬彊%張誌勇%王進忠
진욱기%학소동%왕합%도만강%장지용%왕진충
枣疯病植原体DNA%氯化铯双苯酰亚胺密度梯度离心法%实时荧光定量PCR
棘瘋病植原體DNA%氯化銫雙苯酰亞胺密度梯度離心法%實時熒光定量PCR
조풍병식원체DNA%록화색쌍분선아알밀도제도리심법%실시형광정량PCR
JWB phytoplasma DNA%CsCl-bisbenzimi dedensity gradients centrifugation%Real-time PCR
分离纯化枣疯病植原体基因组DNA,有助于进一步开展对此病原全基因组测序的研究,CTAB法提取枣疯病叶片的总DNA后,采用氯化铯双苯酰亚胺密度梯度离心法从枣树总DNA中富集纯化枣疯病植原体DNA,并通过Real-time PCR方法对分离纯化效果进行定量检测.在此基础上,探索了不同CsCl初始密度对DNA分离效果的影响.在20℃,初始密度为1.650 0 g/cm3,经206 000×g下离心23 h后,感染枣疯病样品(IS)的离心管中出现2条DNA亮带,正常枣树样品(NS)离心管中只有1条.Real-time PCR检测结果表明NS管中的条带为枣树基因组DNA;IS管中与NS管中相同位置的条带为枣树基因组DNA,另1条带为枣疯病植原体基因组DNA.在保留其他试验条件下,不同CsCl初始密度,会影响DNA条带的位置,也会影响枣疯病植原体DNA与枣树DNA的分离效果,在1.562 2 g/cm3的初始浓度下分离效果最好.采用超速离心法可以有效地从感染枣疯病的枣树中分离得到纯的枣疯病植原体DNA,同时利用Real-time PCR法可以实现分离效果的评价,利用此方法分离得到的DNA可用于枣疯病植原体的全基因组测序.
分離純化棘瘋病植原體基因組DNA,有助于進一步開展對此病原全基因組測序的研究,CTAB法提取棘瘋病葉片的總DNA後,採用氯化銫雙苯酰亞胺密度梯度離心法從棘樹總DNA中富集純化棘瘋病植原體DNA,併通過Real-time PCR方法對分離純化效果進行定量檢測.在此基礎上,探索瞭不同CsCl初始密度對DNA分離效果的影響.在20℃,初始密度為1.650 0 g/cm3,經206 000×g下離心23 h後,感染棘瘋病樣品(IS)的離心管中齣現2條DNA亮帶,正常棘樹樣品(NS)離心管中隻有1條.Real-time PCR檢測結果錶明NS管中的條帶為棘樹基因組DNA;IS管中與NS管中相同位置的條帶為棘樹基因組DNA,另1條帶為棘瘋病植原體基因組DNA.在保留其他試驗條件下,不同CsCl初始密度,會影響DNA條帶的位置,也會影響棘瘋病植原體DNA與棘樹DNA的分離效果,在1.562 2 g/cm3的初始濃度下分離效果最好.採用超速離心法可以有效地從感染棘瘋病的棘樹中分離得到純的棘瘋病植原體DNA,同時利用Real-time PCR法可以實現分離效果的評價,利用此方法分離得到的DNA可用于棘瘋病植原體的全基因組測序.
분리순화조풍병식원체기인조DNA,유조우진일보개전대차병원전기인조측서적연구,CTAB법제취조풍병협편적총DNA후,채용록화색쌍분선아알밀도제도리심법종조수총DNA중부집순화조풍병식원체DNA,병통과Real-time PCR방법대분리순화효과진행정량검측.재차기출상,탐색료불동CsCl초시밀도대DNA분리효과적영향.재20℃,초시밀도위1.650 0 g/cm3,경206 000×g하리심23 h후,감염조풍병양품(IS)적리심관중출현2조DNA량대,정상조수양품(NS)리심관중지유1조.Real-time PCR검측결과표명NS관중적조대위조수기인조DNA;IS관중여NS관중상동위치적조대위조수기인조DNA,령1조대위조풍병식원체기인조DNA.재보류기타시험조건하,불동CsCl초시밀도,회영향DNA조대적위치,야회영향조풍병식원체DNA여조수DNA적분리효과,재1.562 2 g/cm3적초시농도하분리효과최호.채용초속리심법가이유효지종감염조풍병적조수중분리득도순적조풍병식원체DNA,동시이용Real-time PCR법가이실현분리효과적평개,이용차방법분리득도적DNA가용우조풍병식원체적전기인조측서.
