微生物学杂志
微生物學雜誌
미생물학잡지
JOURNAL OF MICROBIOLOGY
2014年
6期
10-14
,共5页
郑方亮%王励%于亮%郑振华%郑才尚%刘宏生
鄭方亮%王勵%于亮%鄭振華%鄭纔尚%劉宏生
정방량%왕려%우량%정진화%정재상%류굉생
EV71病毒%2C蛋白%原核表达%多克隆抗体
EV71病毒%2C蛋白%原覈錶達%多剋隆抗體
EV71병독%2C단백%원핵표체%다극륭항체
Enterovirus 71 (EV71)%protein 2C (P2C)%prokaryotic expression%polyclonal antibody
肠道病毒71型(EV71)的非结构蛋白2C(P2C)在病毒复制周期中起着重要的作用,制备P2C的特异性抗体,对研究P2C的生物学功能以及EV71与宿主相互作用的具体机制有非常重要的意义.实验将2C基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达出重组蛋白rP2C,进一步优化原核表达条件,在温度为30℃,诱导剂IPTG浓度为1 mmol/L时,蛋白表达量最高,且主要以包涵体形式存在.直接将获得的rP2C通过SDS-PAGE分离后免疫新西兰兔,制备EV71病毒P2C的兔多克隆抗体.通过Westernblot检测,该抗体在1:10 000稀释比例下仍能很好地识别原核表达的rP2C.同时该抗体也能很好地检测到EV71感染RD细胞中的P2C.因此,实验制备出的抗P2C抗体特异性强、效价高,为后续P2C功能的研究以及EV71病毒检测提供了良好的材料.
腸道病毒71型(EV71)的非結構蛋白2C(P2C)在病毒複製週期中起著重要的作用,製備P2C的特異性抗體,對研究P2C的生物學功能以及EV71與宿主相互作用的具體機製有非常重要的意義.實驗將2C基因剋隆到原覈錶達載體pET-28a(+)上,在大腸埃希菌BL21(DE3)中錶達齣重組蛋白rP2C,進一步優化原覈錶達條件,在溫度為30℃,誘導劑IPTG濃度為1 mmol/L時,蛋白錶達量最高,且主要以包涵體形式存在.直接將穫得的rP2C通過SDS-PAGE分離後免疫新西蘭兔,製備EV71病毒P2C的兔多剋隆抗體.通過Westernblot檢測,該抗體在1:10 000稀釋比例下仍能很好地識彆原覈錶達的rP2C.同時該抗體也能很好地檢測到EV71感染RD細胞中的P2C.因此,實驗製備齣的抗P2C抗體特異性彊、效價高,為後續P2C功能的研究以及EV71病毒檢測提供瞭良好的材料.
장도병독71형(EV71)적비결구단백2C(P2C)재병독복제주기중기착중요적작용,제비P2C적특이성항체,대연구P2C적생물학공능이급EV71여숙주상호작용적구체궤제유비상중요적의의.실험장2C기인극륭도원핵표체재체pET-28a(+)상,재대장애희균BL21(DE3)중표체출중조단백rP2C,진일보우화원핵표체조건,재온도위30℃,유도제IPTG농도위1 mmol/L시,단백표체량최고,차주요이포함체형식존재.직접장획득적rP2C통과SDS-PAGE분리후면역신서란토,제비EV71병독P2C적토다극륭항체.통과Westernblot검측,해항체재1:10 000희석비례하잉능흔호지식별원핵표체적rP2C.동시해항체야능흔호지검측도EV71감염RD세포중적P2C.인차,실험제비출적항P2C항체특이성강、효개고,위후속P2C공능적연구이급EV71병독검측제공료량호적재료.
