CAJ | 학술논문

目的：对阿尔茨海默病中β淀粉样前体蛋白羧基端短肽C31含有的毒性作用及其与自噬之间的相关性进行研究分析，并且探讨自噬是否可以介导该种物质的清除。方法：首先构建C31质粒作为实验组，而且构建VECTOR质粒，将其作为对照组；其次，通过脂质体转染法将其转染到Appsw Hek293细胞系里；然后通过WESTERN BLOT的方法对其表达进行有效验证；再者，对两种质粒应用Mtt法来进行瞬时转染四十八小时后的细胞存活率的检测，各自给予不一样的自噬调节药物，从而对C31和自噬相关蛋白采用WESTERN BLOT方法进行检测；最后，分别采用免疫共沉淀法、免疫荧光检测法对C31和LC3进行检测，分别确定其是否结合、能否共位，从而对自噬是不是介导C31降解的重要途径而进一步验证。结果：实验组（C31）转染组细胞活力与对照组相比，明显较低（P＜0.05）；实验组和对照组的自噬水平没有表现出显著的差异；在采取雷帕霉素与饥饿处理方式以促进自噬的前提下，与没有加药处理的小组相比，LC3-Ⅱ水平较高，只是尚未具有统计学意义；C31水平与空载水平差异相对来说，并未具有统计学意义；3- MA自噬抑制剂的应用使得LC3-Ⅱ水平有些许下降，C31水平得以一定的改变，两者都不具有统计学意义；增加自噬体与NH4Cl、CQ之后，细胞自噬水平得到显著上升，CQ发挥了最显著的作用，C31水平和空载水平相比，显著上升了（P＜0.05）。在Sh- Sy5y细胞中得到的结果是相似的，只是C31水平在NH4Cl、CQ作用之后，与空载水平相比，并不具有统计学差异。免疫荧光法检测之后，C31结合于LC3，锚定在自噬体上，从而在自噬代谢这一过程中充当了参与者的角色。结论：无论是Appsw Hek293细胞系还是Sh- Sy5y细胞系，都具有毒性作用，过表达C31并不会对细胞自噬水平带来改变，自噬能介导C31的清除，自噬也许可以对阿尔茨海默病发挥保护性的作用。目的：對阿爾茨海默病中β澱粉樣前體蛋白羧基耑短肽C31含有的毒性作用及其與自噬之間的相關性進行研究分析，併且探討自噬是否可以介導該種物質的清除。方法：首先構建C31質粒作為實驗組，而且構建VECTOR質粒，將其作為對照組；其次，通過脂質體轉染法將其轉染到Appsw Hek293細胞繫裏；然後通過WESTERN BLOT的方法對其錶達進行有效驗證；再者，對兩種質粒應用Mtt法來進行瞬時轉染四十八小時後的細胞存活率的檢測，各自給予不一樣的自噬調節藥物，從而對C31和自噬相關蛋白採用WESTERN BLOT方法進行檢測；最後，分彆採用免疫共沉澱法、免疫熒光檢測法對C31和LC3進行檢測，分彆確定其是否結閤、能否共位，從而對自噬是不是介導C31降解的重要途徑而進一步驗證。結果：實驗組（C31）轉染組細胞活力與對照組相比，明顯較低（P＜0.05）；實驗組和對照組的自噬水平沒有錶現齣顯著的差異；在採取雷帕黴素與饑餓處理方式以促進自噬的前提下，與沒有加藥處理的小組相比，LC3-Ⅱ水平較高，隻是尚未具有統計學意義；C31水平與空載水平差異相對來說，併未具有統計學意義；3- MA自噬抑製劑的應用使得LC3-Ⅱ水平有些許下降，C31水平得以一定的改變，兩者都不具有統計學意義；增加自噬體與NH4Cl、CQ之後，細胞自噬水平得到顯著上升，CQ髮揮瞭最顯著的作用，C31水平和空載水平相比，顯著上升瞭（P＜0.05）。在Sh- Sy5y細胞中得到的結果是相似的，隻是C31水平在NH4Cl、CQ作用之後，與空載水平相比，併不具有統計學差異。免疫熒光法檢測之後，C31結閤于LC3，錨定在自噬體上，從而在自噬代謝這一過程中充噹瞭參與者的角色。結論：無論是Appsw Hek293細胞繫還是Sh- Sy5y細胞繫，都具有毒性作用，過錶達C31併不會對細胞自噬水平帶來改變，自噬能介導C31的清除，自噬也許可以對阿爾茨海默病髮揮保護性的作用。
목적：대아이자해묵병중β정분양전체단백최기단단태C31함유적독성작용급기여자서지간적상관성진행연구분석，병차탐토자서시부가이개도해충물질적청제。방법：수선구건C31질립작위실험조，이차구건VECTOR질립，장기작위대조조；기차，통과지질체전염법장기전염도Appsw Hek293세포계리；연후통과WESTERN BLOT적방법대기표체진행유효험증；재자，대량충질립응용Mtt법래진행순시전염사십팔소시후적세포존활솔적검측，각자급여불일양적자서조절약물，종이대C31화자서상관단백채용WESTERN BLOT방법진행검측；최후，분별채용면역공침정법、면역형광검측법대C31화LC3진행검측，분별학정기시부결합、능부공위，종이대자서시불시개도C31강해적중요도경이진일보험증。결과：실험조（C31）전염조세포활력여대조조상비，명현교저（P＜0.05）；실험조화대조조적자서수평몰유표현출현저적차이；재채취뢰파매소여기아처리방식이촉진자서적전제하，여몰유가약처리적소조상비，LC3-Ⅱ수평교고，지시상미구유통계학의의；C31수평여공재수평차이상대래설，병미구유통계학의의；3- MA자서억제제적응용사득LC3-Ⅱ수평유사허하강，C31수평득이일정적개변，량자도불구유통계학의의；증가자서체여NH4Cl、CQ지후，세포자서수평득도현저상승，CQ발휘료최현저적작용，C31수평화공재수평상비，현저상승료（P＜0.05）。재Sh- Sy5y세포중득도적결과시상사적，지시C31수평재NH4Cl、CQ작용지후，여공재수평상비，병불구유통계학차이。면역형광법검측지후，C31결합우LC3，묘정재자서체상，종이재자서대사저일과정중충당료삼여자적각색。결론：무론시Appsw Hek293세포계환시Sh- Sy5y세포계，도구유독성작용，과표체C31병불회대세포자서수평대래개변，자서능개도C31적청제，자서야허가이대아이자해묵병발휘보호성적작용。