现代泌尿外科杂志
現代泌尿外科雜誌
현대비뇨외과잡지
JOURNAL OF MODERN UROLOGY
2015年
4期
264-268
,共5页
自噬%肾透明细胞癌%自噬相关基因7%sh-A tg7%plenti6.3-A tg7
自噬%腎透明細胞癌%自噬相關基因7%sh-A tg7%plenti6.3-A tg7
자서%신투명세포암%자서상관기인7%sh-A tg7%plenti6.3-A tg7
autophagy%renal clear cell carcinoma%Atg7%sh-Atg7%plenti6 .3-Atg7
目的：探讨诱导／封闭A tg7对肾癌786-0细胞自噬的调控作用。方法构建上调A tg7的慢病毒载体plenti6．3-A tg7，下调Atg7的慢病毒载体sh-Atg-1 lv、sh-Atg-2 lv ，空载对照慢病毒载体sh-scramb-con lv、plenti6．3-GFP ，分别转染肾癌786-0细胞系，未转染的786-0细胞系为空白对照。RT-PCR和Western blot检测各组Atg7的表达，研究plenti6．3-Atg7激活Atg7效率和sh-Atg-1 lv、sh-Atg-2 lv抑制Atg7效率。Western blot检测上述各组细胞LCII／LC3I蛋白比值，研究上调及下调 Atg7对肾癌786-0细胞自噬的激活及抑制作用。结果经过筛选，成功构建稳定上调Atg7的786-0／plenti6．3-Atg7xbx细胞系、稳定下调Atg7的786-0／sh-Atg-2 lv细胞系、空载对照786-0／sh-scramb-con lv、786-0／plenti6．3-GFP细胞系。与空白对照组比较，Atg7上调组786-0细胞LCII／LC3I比值显著升高（3．31±0．12 vs ．2．23±0．10 P＜0．01），具有稳定的自噬激活作用；Atg7下调组的786-0细胞LCII／LC3I比值显著降低（1．45 ± 0．11 vs ．2．23±0．10 P＜0．01），具有稳定自噬抑制作用。结论上调Atg7对肾癌786-0细胞系具有自噬激活作用，下调A tg7对肾癌786-0细胞系具有自噬抑制作用。
目的：探討誘導／封閉A tg7對腎癌786-0細胞自噬的調控作用。方法構建上調A tg7的慢病毒載體plenti6．3-A tg7，下調Atg7的慢病毒載體sh-Atg-1 lv、sh-Atg-2 lv ，空載對照慢病毒載體sh-scramb-con lv、plenti6．3-GFP ，分彆轉染腎癌786-0細胞繫，未轉染的786-0細胞繫為空白對照。RT-PCR和Western blot檢測各組Atg7的錶達，研究plenti6．3-Atg7激活Atg7效率和sh-Atg-1 lv、sh-Atg-2 lv抑製Atg7效率。Western blot檢測上述各組細胞LCII／LC3I蛋白比值，研究上調及下調 Atg7對腎癌786-0細胞自噬的激活及抑製作用。結果經過篩選，成功構建穩定上調Atg7的786-0／plenti6．3-Atg7xbx細胞繫、穩定下調Atg7的786-0／sh-Atg-2 lv細胞繫、空載對照786-0／sh-scramb-con lv、786-0／plenti6．3-GFP細胞繫。與空白對照組比較，Atg7上調組786-0細胞LCII／LC3I比值顯著升高（3．31±0．12 vs ．2．23±0．10 P＜0．01），具有穩定的自噬激活作用；Atg7下調組的786-0細胞LCII／LC3I比值顯著降低（1．45 ± 0．11 vs ．2．23±0．10 P＜0．01），具有穩定自噬抑製作用。結論上調Atg7對腎癌786-0細胞繫具有自噬激活作用，下調A tg7對腎癌786-0細胞繫具有自噬抑製作用。
목적：탐토유도／봉폐A tg7대신암786-0세포자서적조공작용。방법구건상조A tg7적만병독재체plenti6．3-A tg7，하조Atg7적만병독재체sh-Atg-1 lv、sh-Atg-2 lv ，공재대조만병독재체sh-scramb-con lv、plenti6．3-GFP ，분별전염신암786-0세포계，미전염적786-0세포계위공백대조。RT-PCR화Western blot검측각조Atg7적표체，연구plenti6．3-Atg7격활Atg7효솔화sh-Atg-1 lv、sh-Atg-2 lv억제Atg7효솔。Western blot검측상술각조세포LCII／LC3I단백비치，연구상조급하조 Atg7대신암786-0세포자서적격활급억제작용。결과경과사선，성공구건은정상조Atg7적786-0／plenti6．3-Atg7xbx세포계、은정하조Atg7적786-0／sh-Atg-2 lv세포계、공재대조786-0／sh-scramb-con lv、786-0／plenti6．3-GFP세포계。여공백대조조비교，Atg7상조조786-0세포LCII／LC3I비치현저승고（3．31±0．12 vs ．2．23±0．10 P＜0．01），구유은정적자서격활작용；Atg7하조조적786-0세포LCII／LC3I비치현저강저（1．45 ± 0．11 vs ．2．23±0．10 P＜0．01），구유은정자서억제작용。결론상조Atg7대신암786-0세포계구유자서격활작용，하조A tg7대신암786-0세포계구유자서억제작용。
Objective To explore the regulative effect of autophagy-related gene Atg7 on the autophagy of 786-0 cell line in renal cell carcinoma (RCC) .Methods Atg7-overexpression plasmid plenti6 .3-Atg7 and Atg7 specific microRNA-express-ing plasmid sh-Atg-2 lv were established and identified .Plenti6 .3-Atg7 and sh-Atg-2 lv were transfected into 786-0 cells ,West-ern blot was used to detect LCII/LC3I respectively .Results 786-0 cells with Atg7-overexpression and Atg7-knockdown were obtained .Cells with Atg7-overexpression showed increased LC3II/LC3I compared with controls(3 .31 ± 0 .12 vs .2 .23 ± 0.10 , P<0 .01) ,while cells with Atg7-knockdown showed reduced LC3II/LC3I compared with controls(1 .45 ± 0 .11 vs .2.23 ± 0.10 ,P<0 .01) .Conclusions 786-0 cells with Atg7-overexpression promote autophagy while 786-0 cells with Atg7-knock-down inhibit autophagy .
