CAJ | 학술논문

[目的]采集凉水国家级自然保护区原始森林土壤样品,分离产漆酶真菌并优化产酶条件,旨在开发产漆酶半知真菌种质资源,提高漆酶产量,为微生物漆酶扩大生产提供菌种资源和条件参数.[方法]以木质素磺酸钠为唯一碳源的无机盐培养基为富集培养基,在愈创木酚-PDA选择性平板上分离产漆酶真菌.利用ABTS[2,2 ′-连氮一双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)]和SGZ [4-羟基-3,5-二甲氧基一苯甲醛连氮,即丁香醛联氮]显色反应初筛和摇瓶发酵复筛.确定供试菌株后,利用形态观察结合rDNA-ITS序列分析技术,将菌株鉴定至种.以ABTS法测定供试菌发酵液漆酶活性,以Lowry法测定发酵液总蛋白含量.在考察供试菌株生长、产酶及胞外蛋白总量动态变化基础上,通过单因素试验,研究碳源种类及浓度、氮源种类及浓度、培养基起始pH、装液量、接种量及底物诱导对菌株产漆酶的影响,获得菌株产酶最适培养基组分和培养条件参数.[结果]获得1株发酵周期短、初始酶活高的产酶菌株NF-08.结合形态学特征与rDNA-ITS序列分析结果,鉴定菌株NF-08属于为半知菌亚门疣孢漆斑菌.该菌株在液体发酵培养基中产漆酶活性与菌丝生长和胞外蛋白总量基本同步,发酵第6天达到酶活峰值9.28 U·mL-1.疣孢漆斑菌NF-08产酶最佳碳、氮源分别为4.0％葡萄糖和3.5％蛋白胨,培养基初始pH7.0.最适装液量60 mL·(250 mL)-1,最适接种量4％,最适培养温度和摇床转速分别为30℃和140 r·min-1.没食子酸、阿魏酸和单宁酸显著诱导疣孢漆斑菌NF-08漆酶活性的产生,以没食子酸效果最好.经过培养基组分和培养条件优化以及底物诱导,疣孢漆斑菌NF-08产酶水平达到16.82 U·mL-1,比优化前提高了81.25％.[结论]建立环境样品中产漆酶真菌的分离、纯化及筛选方法,获得了一株发酵周期短、产漆酶活力高的半知真菌疣孢漆斑菌NF-08.该菌株经单因素试验产酶条件优化效果明显,酶活水平提高显著,可为微生物发酵产漆酶提供新的菌株资源,在微生物发酵漆酶工业生产中具有应用潜力.后续对疣孢漆斑菌NF-08漆酶产生、性质及基因表达调控的深入研究,将有助于了解漆酶在半知真菌生活史中的作用及生态学功能,同时拓展半知真菌漆酶的应用领域. [目的]採集涼水國傢級自然保護區原始森林土壤樣品,分離產漆酶真菌併優化產酶條件,旨在開髮產漆酶半知真菌種質資源,提高漆酶產量,為微生物漆酶擴大生產提供菌種資源和條件參數.[方法]以木質素磺痠鈉為唯一碳源的無機鹽培養基為富集培養基,在愈創木酚-PDA選擇性平闆上分離產漆酶真菌.利用ABTS[2,2 ′-連氮一雙(3-乙基苯併噻唑-6-磺痠)]和SGZ [4-羥基-3,5-二甲氧基一苯甲醛連氮,即丁香醛聯氮]顯色反應初篩和搖瓶髮酵複篩.確定供試菌株後,利用形態觀察結閤rDNA-ITS序列分析技術,將菌株鑒定至種.以ABTS法測定供試菌髮酵液漆酶活性,以Lowry法測定髮酵液總蛋白含量.在攷察供試菌株生長、產酶及胞外蛋白總量動態變化基礎上,通過單因素試驗,研究碳源種類及濃度、氮源種類及濃度、培養基起始pH、裝液量、接種量及底物誘導對菌株產漆酶的影響,穫得菌株產酶最適培養基組分和培養條件參數.[結果]穫得1株髮酵週期短、初始酶活高的產酶菌株NF-08.結閤形態學特徵與rDNA-ITS序列分析結果,鑒定菌株NF-08屬于為半知菌亞門疣孢漆斑菌.該菌株在液體髮酵培養基中產漆酶活性與菌絲生長和胞外蛋白總量基本同步,髮酵第6天達到酶活峰值9.28 U·mL-1.疣孢漆斑菌NF-08產酶最佳碳、氮源分彆為4.0％葡萄糖和3.5％蛋白胨,培養基初始pH7.0.最適裝液量60 mL·(250 mL)-1,最適接種量4％,最適培養溫度和搖床轉速分彆為30℃和140 r·min-1.沒食子痠、阿魏痠和單寧痠顯著誘導疣孢漆斑菌NF-08漆酶活性的產生,以沒食子痠效果最好.經過培養基組分和培養條件優化以及底物誘導,疣孢漆斑菌NF-08產酶水平達到16.82 U·mL-1,比優化前提高瞭81.25％.[結論]建立環境樣品中產漆酶真菌的分離、純化及篩選方法,穫得瞭一株髮酵週期短、產漆酶活力高的半知真菌疣孢漆斑菌NF-08.該菌株經單因素試驗產酶條件優化效果明顯,酶活水平提高顯著,可為微生物髮酵產漆酶提供新的菌株資源,在微生物髮酵漆酶工業生產中具有應用潛力.後續對疣孢漆斑菌NF-08漆酶產生、性質及基因錶達調控的深入研究,將有助于瞭解漆酶在半知真菌生活史中的作用及生態學功能,同時拓展半知真菌漆酶的應用領域.
[목적]채집량수국가급자연보호구원시삼림토양양품,분리산칠매진균병우화산매조건,지재개발산칠매반지진균충질자원,제고칠매산량,위미생물칠매확대생산제공균충자원화조건삼수.[방법]이목질소광산납위유일탄원적무궤염배양기위부집배양기,재유창목분-PDA선택성평판상분리산칠매진균.이용ABTS[2,2 ′-련담일쌍(3-을기분병새서-6-광산)]화SGZ [4-간기-3,5-이갑양기일분갑철련담,즉정향철련담]현색반응초사화요병발효복사.학정공시균주후,이용형태관찰결합rDNA-ITS서렬분석기술,장균주감정지충.이ABTS법측정공시균발효액칠매활성,이Lowry법측정발효액총단백함량.재고찰공시균주생장、산매급포외단백총량동태변화기출상,통과단인소시험,연구탄원충류급농도、담원충류급농도、배양기기시pH、장액량、접충량급저물유도대균주산칠매적영향,획득균주산매최괄배양기조분화배양조건삼수.[결과]획득1주발효주기단、초시매활고적산매균주NF-08.결합형태학특정여rDNA-ITS서렬분석결과,감정균주NF-08속우위반지균아문우포칠반균.해균주재액체발효배양기중산칠매활성여균사생장화포외단백총량기본동보,발효제6천체도매활봉치9.28 U·mL-1.우포칠반균NF-08산매최가탄、담원분별위4.0％포도당화3.5％단백동,배양기초시pH7.0.최괄장액량60 mL·(250 mL)-1,최괄접충량4％,최괄배양온도화요상전속분별위30℃화140 r·min-1.몰식자산、아위산화단저산현저유도우포칠반균NF-08칠매활성적산생,이몰식자산효과최호.경과배양기조분화배양조건우화이급저물유도,우포칠반균NF-08산매수평체도16.82 U·mL-1,비우화전제고료81.25％.[결론]건립배경양품중산칠매진균적분리、순화급사선방법,획득료일주발효주기단、산칠매활력고적반지진균우포칠반균NF-08.해균주경단인소시험산매조건우화효과명현,매활수평제고현저,가위미생물발효산칠매제공신적균주자원,재미생물발효칠매공업생산중구유응용잠력.후속대우포칠반균NF-08칠매산생、성질급기인표체조공적심입연구,장유조우료해칠매재반지진균생활사중적작용급생태학공능,동시탁전반지진균칠매적응용영역.