CAJ | 학술논문

α-黑素细胞刺激素%糖尿病视网膜病变/治疗%细胞间黏附分子-1%肿瘤坏死因子-α%闭合蛋白%血管内皮生长因子%血-视网膜屏障%SD大鼠 α-黑素細胞刺激素%糖尿病視網膜病變/治療%細胞間黏附分子-1%腫瘤壞死因子-α%閉閤蛋白%血管內皮生長因子%血-視網膜屏障%SD大鼠
α-흑소세포자격소%당뇨병시망막병변/치료%세포간점부분자-1%종류배사인자-α%폐합단백%혈관내피생장인자%혈-시망막병장%SD대서
α-Melanocyte-stimulating hormone%Diabetic retinopathy/therapy%Intercellular adhesion molecule-1%Tumor necrosis factor-α%Occludin%Vascular endothelial growth factor%Blood-retina barrier%Rats,Sprague Dawley

背景糖尿病视网膜病变(DR)的主要病理基础是视网膜的微血管变化和炎性改变.研究认为α-黑素细胞刺激素(α-MSH)玻璃体腔注射可对视网膜脉络膜组织发挥抗氧化应激和抗凋亡作用,从而改善血-视网膜屏障(BRB)功能,但缺乏组织学研究的验证.目的研究α-MSH对视网膜血管渗漏的改善作用.方法应用随机数字表法将清洁级SD大鼠90只随机分为正常对照组、糖尿病(DM)模型组和α-MSH组,DM模型组和α-MSH组大鼠采用尾静脉注射链脲佐菌素(STZ)法制备模型,正常对照组大鼠同法注射枸橼酸钠缓冲液.α-MSH组大鼠分别于造模后1周和3周玻璃体腔注射3.3 μg/μl α-MSH 3 μl,正常对照组大鼠同法注射生理盐水3μl,DM模型组不行玻璃体腔注射.造模后第5周,按照45 mg/kg的剂量经鼠尾静脉注射30 mg/ml伊文思蓝溶液,注射后2h每组取2只大鼠制备视网膜铺片,于荧光显微镜下观察视网膜血管形态;收集各组8只大鼠内眦部血液,检测BRB渗漏状况;用37℃枸橼酸钠缓冲液行左心室灌流,处死大鼠,分离大鼠视网膜,透射电子显微镜下观察脉络膜和视网膜血管超微结构的变化;采用实时定量PCR法检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、闭合蛋白(occludin)和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的相对表达水平.结果 DM模型大鼠体质量明显降低,饮水量明显增多;造模后3d和5周,DM模型组大鼠的血糖分别为(29.69±4.77) mmol/L和(24.64±2.72) mmol/L,DM模型成功建立.视网膜铺片显示,DM模型组大鼠视网膜血管走行异常,血管壁大量伊文思蓝渗漏,而α-MSH组大鼠视网膜血管形态接近正常对照组.造模后5周,DM模型组大鼠视网膜伊文思蓝的渗漏量为(10.04±8.18) μl/(g·h),明显多于α-MSH组的(2.62±3.73) μl/(g·h)和正常对照组的(3.10±1.13) μl/(g·h),差异均有统计学意义(P=0.035、0.041).α-MSH组大鼠脉络膜和视网膜血管的超微结构接近正常对照组,而DM模型组大鼠脉络膜血管内皮细胞肿胀,视网膜色素上皮(RPE)空泡样变性.此外,DM模型组大鼠视网膜中ICAM-1 mRNA和TNF-αmRNA水平明显高于α-MSH组和正常对照组,而occludin mRNA的相对表达水平明显低于o-MSH组和正常对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).3个组大鼠视网膜中VEGF mRNA相对表达量的整体比较,差异无统计学意义(F=0.791,P=0.466).结论在STZ诱导的DM模型大鼠中,玻璃体腔注射α-MSH可通过减少视网膜血管的渗漏,改善脉络膜和视网膜血管的超微结构,下调视网膜中促炎因子的表达和上调细胞间紧密连接成分的表达发挥对视网膜的保护作用. 揹景糖尿病視網膜病變(DR)的主要病理基礎是視網膜的微血管變化和炎性改變.研究認為α-黑素細胞刺激素(α-MSH)玻璃體腔註射可對視網膜脈絡膜組織髮揮抗氧化應激和抗凋亡作用,從而改善血-視網膜屏障(BRB)功能,但缺乏組織學研究的驗證.目的研究α-MSH對視網膜血管滲漏的改善作用.方法應用隨機數字錶法將清潔級SD大鼠90隻隨機分為正常對照組、糖尿病(DM)模型組和α-MSH組,DM模型組和α-MSH組大鼠採用尾靜脈註射鏈脲佐菌素(STZ)法製備模型,正常對照組大鼠同法註射枸櫞痠鈉緩遲液.α-MSH組大鼠分彆于造模後1週和3週玻璃體腔註射3.3 μg/μl α-MSH 3 μl,正常對照組大鼠同法註射生理鹽水3μl,DM模型組不行玻璃體腔註射.造模後第5週,按照45 mg/kg的劑量經鼠尾靜脈註射30 mg/ml伊文思藍溶液,註射後2h每組取2隻大鼠製備視網膜鋪片,于熒光顯微鏡下觀察視網膜血管形態;收集各組8隻大鼠內眥部血液,檢測BRB滲漏狀況;用37℃枸櫞痠鈉緩遲液行左心室灌流,處死大鼠,分離大鼠視網膜,透射電子顯微鏡下觀察脈絡膜和視網膜血管超微結構的變化;採用實時定量PCR法檢測細胞間黏附分子-1(ICAM-1)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、閉閤蛋白(occludin)和血管內皮生長因子(VEGF)mRNA的相對錶達水平.結果 DM模型大鼠體質量明顯降低,飲水量明顯增多;造模後3d和5週,DM模型組大鼠的血糖分彆為(29.69±4.77) mmol/L和(24.64±2.72) mmol/L,DM模型成功建立.視網膜鋪片顯示,DM模型組大鼠視網膜血管走行異常,血管壁大量伊文思藍滲漏,而α-MSH組大鼠視網膜血管形態接近正常對照組.造模後5週,DM模型組大鼠視網膜伊文思藍的滲漏量為(10.04±8.18) μl/(g·h),明顯多于α-MSH組的(2.62±3.73) μl/(g·h)和正常對照組的(3.10±1.13) μl/(g·h),差異均有統計學意義(P=0.035、0.041).α-MSH組大鼠脈絡膜和視網膜血管的超微結構接近正常對照組,而DM模型組大鼠脈絡膜血管內皮細胞腫脹,視網膜色素上皮(RPE)空泡樣變性.此外,DM模型組大鼠視網膜中ICAM-1 mRNA和TNF-αmRNA水平明顯高于α-MSH組和正常對照組,而occludin mRNA的相對錶達水平明顯低于o-MSH組和正常對照組,差異均有統計學意義(均P＜0.05).3箇組大鼠視網膜中VEGF mRNA相對錶達量的整體比較,差異無統計學意義(F=0.791,P=0.466).結論在STZ誘導的DM模型大鼠中,玻璃體腔註射α-MSH可通過減少視網膜血管的滲漏,改善脈絡膜和視網膜血管的超微結構,下調視網膜中促炎因子的錶達和上調細胞間緊密連接成分的錶達髮揮對視網膜的保護作用.
배경 당뇨병시망막병변(DR)적주요병리기출시시망막적미혈관변화화염성개변.연구인위α-흑소세포자격소(α-MSH)파리체강주사가대시망막맥락막조직발휘항양화응격화항조망작용,종이개선혈-시망막병장(BRB)공능,단결핍조직학연구적험증.목적 연구α-MSH대시망막혈관삼루적개선작용.방법 응용수궤수자표법장청길급SD대서90지수궤분위정상대조조、당뇨병(DM)모형조화α-MSH조,DM모형조화α-MSH조대서채용미정맥주사련뇨좌균소(STZ)법제비모형,정상대조조대서동법주사구연산납완충액.α-MSH조대서분별우조모후1주화3주파리체강주사3.3 μg/μl α-MSH 3 μl,정상대조조대서동법주사생리염수3μl,DM모형조불행파리체강주사.조모후제5주,안조45 mg/kg적제량경서미정맥주사30 mg/ml이문사람용액,주사후2h매조취2지대서제비시망막포편,우형광현미경하관찰시망막혈관형태;수집각조8지대서내자부혈액,검측BRB삼루상황;용37℃구연산납완충액행좌심실관류,처사대서,분리대서시망막,투사전자현미경하관찰맥락막화시망막혈관초미결구적변화;채용실시정량PCR법검측세포간점부분자-1(ICAM-1)、종류배사인자-α(TNF-α)、폐합단백(occludin)화혈관내피생장인자(VEGF)mRNA적상대표체수평.결과 DM모형대서체질량명현강저,음수량명현증다;조모후3d화5주,DM모형조대서적혈당분별위(29.69±4.77) mmol/L화(24.64±2.72) mmol/L,DM모형성공건립.시망막포편현시,DM모형조대서시망막혈관주행이상,혈관벽대량이문사람삼루,이α-MSH조대서시망막혈관형태접근정상대조조.조모후5주,DM모형조대서시망막이문사람적삼루량위(10.04±8.18) μl/(g·h),명현다우α-MSH조적(2.62±3.73) μl/(g·h)화정상대조조적(3.10±1.13) μl/(g·h),차이균유통계학의의(P=0.035、0.041).α-MSH조대서맥락막화시망막혈관적초미결구접근정상대조조,이DM모형조대서맥락막혈관내피세포종창,시망막색소상피(RPE)공포양변성.차외,DM모형조대서시망막중ICAM-1 mRNA화TNF-αmRNA수평명현고우α-MSH조화정상대조조,이occludin mRNA적상대표체수평명현저우o-MSH조화정상대조조,차이균유통계학의의(균P＜0.05).3개조대서시망막중VEGF mRNA상대표체량적정체비교,차이무통계학의의(F=0.791,P=0.466).결론 재STZ유도적DM모형대서중,파리체강주사α-MSH가통과감소시망막혈관적삼루,개선맥락막화시망막혈관적초미결구,하조시망막중촉염인자적표체화상조세포간긴밀련접성분적표체발휘대시망막적보호작용.