中华实验眼科杂志
中華實驗眼科雜誌
중화실험안과잡지
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL OPHTHALMOLOGY
2015年
4期
311-315
,共5页
任师杰%张凤妍%祁颖%崔琨明
任師傑%張鳳妍%祁穎%崔琨明
임사걸%장봉연%기영%최곤명
Rho相关激酶/拮抗剂和抑制剂%晶状体上皮细胞/药效%人%细胞迁移%细胞增生%Ⅰ型胶原%纤维连接蛋白%细胞外基质%盐酸法舒地尔/药理作用
Rho相關激酶/拮抗劑和抑製劑%晶狀體上皮細胞/藥效%人%細胞遷移%細胞增生%Ⅰ型膠原%纖維連接蛋白%細胞外基質%鹽痠法舒地爾/藥理作用
Rho상관격매/길항제화억제제%정상체상피세포/약효%인%세포천이%세포증생%Ⅰ형효원%섬유련접단백%세포외기질%염산법서지이/약리작용
Rho-associated kinases/antagonists and inhibitors%Epithelial cells,lens/drug effect%Humans%Cell migration%Cell proliferation%Collagen type Ⅰ%Fibronectins%Extracellular matrix%Fasudil/pharmacology
背景 白内障囊外摘出术后晶状体囊残留的晶状体上皮细胞(LECs)的生物学行为改变是后发性白内障的主要病理改变.Rho激酶抑制剂盐酸法舒地尔具有抑制细胞骨架的重构、迁移、黏附及纤维化等作用,但对LECs的作用尚不清楚.目的 探讨盐酸法舒地尔对人LECs株HLEB-3细胞增生、迁移的作用及其对细胞外基质(ECM)合成的影响.方法 常规培养HLEB-3细胞,对照组细胞仍进行常规培养,药物组培养液中加入不同浓度的盐酸法舒地尔,使其终浓度分别为10、20、40和60 μmol/L,分别于培养后12、24和48 h采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测各组细胞的增生情况,计算不同剂量盐酸法舒地尔对细胞增生的抑制率;分别于处理后12、24、36和48 h采用Transwell小室迁移实验检测各组的迁移细胞数;并于上述时间点采用ELISA法检测各组细胞上清中Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)、纤维连接蛋白(FN)的质量浓度及细胞内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)质量浓度,对各组间的检测结果进行比较.结果 不同浓度盐酸法舒地尔组HLEB-3细胞增生抑制率均明显高于对照组,随着盐酸法舒地尔浓度的增加,HLEB-3细胞增生抑制率明显增加,组间总体差异有统计学意义(F浓度=966.727,P=0.000);随着盐酸法舒地尔作用时间的延长,HLEB-3细胞增生抑制率明显增加,总体比较差异有统计学意义(F时间=280.428,P=0.000).Transwell小室迁移实验显示,实验后48 h,对照组穿过聚碳酸酯膜的细胞数为(29.20±1.28)个,10、20、40和60 μmol/L盐酸法舒地尔组迁移的细胞数分别为(24.40±1.33)、(17.00±1.10)、(14.60±0.68)和(6.60±1.29)个,随着盐酸法舒地尔浓度的增加,HLEB-3细胞的迁移数逐渐减少,差异有统计学意义(F=57.34,P＜0.05).随着盐酸法舒地尔浓度的增加和作用时间的延长,细胞上清液中COL-Ⅰ和FN质量浓度逐渐降低,差异均有统计学意义(COL-Ⅰ:F浓度=143.992,P=0.000;F时间=113.745,P=0.000.FN:F浓度=81.761,P=0.000;F时间=69.602,P=0.000);细胞内α-SMA质量浓度逐渐下降,差异均有统计学意义(F浓度=78.156,P=0.000;F时澡 =65.162,P=0.000).结论 盐酸法舒地尔可抑制体外培养HLEB-3的增生、迁移及ECM的合成,其作用呈剂量和时间依赖性.
揹景 白內障囊外摘齣術後晶狀體囊殘留的晶狀體上皮細胞(LECs)的生物學行為改變是後髮性白內障的主要病理改變.Rho激酶抑製劑鹽痠法舒地爾具有抑製細胞骨架的重構、遷移、黏附及纖維化等作用,但對LECs的作用尚不清楚.目的 探討鹽痠法舒地爾對人LECs株HLEB-3細胞增生、遷移的作用及其對細胞外基質(ECM)閤成的影響.方法 常規培養HLEB-3細胞,對照組細胞仍進行常規培養,藥物組培養液中加入不同濃度的鹽痠法舒地爾,使其終濃度分彆為10、20、40和60 μmol/L,分彆于培養後12、24和48 h採用細胞計數試劑盒8(CCK-8)法檢測各組細胞的增生情況,計算不同劑量鹽痠法舒地爾對細胞增生的抑製率;分彆于處理後12、24、36和48 h採用Transwell小室遷移實驗檢測各組的遷移細胞數;併于上述時間點採用ELISA法檢測各組細胞上清中Ⅰ型膠原(COL-Ⅰ)、纖維連接蛋白(FN)的質量濃度及細胞內α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)質量濃度,對各組間的檢測結果進行比較.結果 不同濃度鹽痠法舒地爾組HLEB-3細胞增生抑製率均明顯高于對照組,隨著鹽痠法舒地爾濃度的增加,HLEB-3細胞增生抑製率明顯增加,組間總體差異有統計學意義(F濃度=966.727,P=0.000);隨著鹽痠法舒地爾作用時間的延長,HLEB-3細胞增生抑製率明顯增加,總體比較差異有統計學意義(F時間=280.428,P=0.000).Transwell小室遷移實驗顯示,實驗後48 h,對照組穿過聚碳痠酯膜的細胞數為(29.20±1.28)箇,10、20、40和60 μmol/L鹽痠法舒地爾組遷移的細胞數分彆為(24.40±1.33)、(17.00±1.10)、(14.60±0.68)和(6.60±1.29)箇,隨著鹽痠法舒地爾濃度的增加,HLEB-3細胞的遷移數逐漸減少,差異有統計學意義(F=57.34,P＜0.05).隨著鹽痠法舒地爾濃度的增加和作用時間的延長,細胞上清液中COL-Ⅰ和FN質量濃度逐漸降低,差異均有統計學意義(COL-Ⅰ:F濃度=143.992,P=0.000;F時間=113.745,P=0.000.FN:F濃度=81.761,P=0.000;F時間=69.602,P=0.000);細胞內α-SMA質量濃度逐漸下降,差異均有統計學意義(F濃度=78.156,P=0.000;F時澡 =65.162,P=0.000).結論 鹽痠法舒地爾可抑製體外培養HLEB-3的增生、遷移及ECM的閤成,其作用呈劑量和時間依賴性.
배경 백내장낭외적출술후정상체낭잔류적정상체상피세포(LECs)적생물학행위개변시후발성백내장적주요병리개변.Rho격매억제제염산법서지이구유억제세포골가적중구、천이、점부급섬유화등작용,단대LECs적작용상불청초.목적 탐토염산법서지이대인LECs주HLEB-3세포증생、천이적작용급기대세포외기질(ECM)합성적영향.방법 상규배양HLEB-3세포,대조조세포잉진행상규배양,약물조배양액중가입불동농도적염산법서지이,사기종농도분별위10、20、40화60 μmol/L,분별우배양후12、24화48 h채용세포계수시제합8(CCK-8)법검측각조세포적증생정황,계산불동제량염산법서지이대세포증생적억제솔;분별우처리후12、24、36화48 h채용Transwell소실천이실험검측각조적천이세포수;병우상술시간점채용ELISA법검측각조세포상청중Ⅰ형효원(COL-Ⅰ)、섬유련접단백(FN)적질량농도급세포내α-평활기기동단백(α-SMA)질량농도,대각조간적검측결과진행비교.결과 불동농도염산법서지이조HLEB-3세포증생억제솔균명현고우대조조,수착염산법서지이농도적증가,HLEB-3세포증생억제솔명현증가,조간총체차이유통계학의의(F농도=966.727,P=0.000);수착염산법서지이작용시간적연장,HLEB-3세포증생억제솔명현증가,총체비교차이유통계학의의(F시간=280.428,P=0.000).Transwell소실천이실험현시,실험후48 h,대조조천과취탄산지막적세포수위(29.20±1.28)개,10、20、40화60 μmol/L염산법서지이조천이적세포수분별위(24.40±1.33)、(17.00±1.10)、(14.60±0.68)화(6.60±1.29)개,수착염산법서지이농도적증가,HLEB-3세포적천이수축점감소,차이유통계학의의(F=57.34,P＜0.05).수착염산법서지이농도적증가화작용시간적연장,세포상청액중COL-Ⅰ화FN질량농도축점강저,차이균유통계학의의(COL-Ⅰ:F농도=143.992,P=0.000;F시간=113.745,P=0.000.FN:F농도=81.761,P=0.000;F시간=69.602,P=0.000);세포내α-SMA질량농도축점하강,차이균유통계학의의(F농도=78.156,P=0.000;F시조 =65.162,P=0.000).결론 염산법서지이가억제체외배양HLEB-3적증생、천이급ECM적합성,기작용정제량화시간의뢰성.
