中华实验眼科杂志
中華實驗眼科雜誌
중화실험안과잡지
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL OPHTHALMOLOGY
2015年
4期
294-299
,共6页
陈琳%粘红%魏瑞华%张红梅%张晓敏%肖青%李雪%李筱荣
陳琳%粘紅%魏瑞華%張紅梅%張曉敏%肖青%李雪%李篠榮
진림%점홍%위서화%장홍매%장효민%초청%리설%리소영
Toll样受体7/激动剂,CL097%葡萄膜炎/免疫性%CD4+T淋巴细胞/分泌%辅助性T细胞17%细胞极性/免疫%炎性因子%树突状细胞/骨髓源性%C57BL/6小鼠
Toll樣受體7/激動劑,CL097%葡萄膜炎/免疫性%CD4+T淋巴細胞/分泌%輔助性T細胞17%細胞極性/免疫%炎性因子%樹突狀細胞/骨髓源性%C57BL/6小鼠
Toll양수체7/격동제,CL097%포도막염/면역성%CD4+T림파세포/분비%보조성T세포17%세포겁성/면역%염성인자%수돌상세포/골수원성%C57BL/6소서
Toll-like receptor 7/agonist,CL097%Uveitis/immunology%CD4-positive T-lymphocytes/secretion%T helper cell 17%Cell polarity/immunology%Inflammation mediators%Dendritic cells/bone marrow-derived%C57BL/6 mouse
背景 研究表明,Toll样受体7(TLR7)在自身免疫性疾病中发挥重要作用,但TLR7在实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)中是否通过树突状细胞(DCs)调控辅助性T淋巴细胞17(Th17)的作用机制鲜见报道.目的 探讨TLR7激动剂CL097处理的小鼠骨髓树突状细胞(BMDCs)对光感受器间维生素A类结合蛋白(IRBP) 1-20-特异性Th17细胞的影响.方法 采用C57BL/6小鼠股骨和胫骨分离小鼠骨髓细胞,将重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)及重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)加入培养基在体外定向诱导BMDCs,于诱导后第6天在培养基中加入5μg/ml CL097作用8h,对照组加入PBS,采用实时荧光定量PCR技术检测CL097处理组与对照组BMDCs中IL-6、IL-23、IL-1β及转化生长因子-β(TGF-β) mRNA的相对表达量.小鼠腹腔内注射百日咳毒素1μg,注射后2h将IRBP1-20与等容积含有结核分枝杆菌HR37RA的完全弗氏佐剂充分乳化后主动免疫C57BL/6小鼠,眼底检查参照Caspi 0 ～4分的标准进行炎症评分.免疫后第13天取眼球制作病理切片,苏木精-伊红染色后行组织病理学检查,并分离小鼠脾脏及淋巴结中IRBP1.20-特异性T细胞,分别与CL097处理组及对照组的BMDCs共培养5d,收集细胞,采用实时荧光定量PCR技术检测2个组细胞中IL-17、γ干扰素(IFN-γ)、维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)和T细胞中表达的T盒21转录因子(T-bet) mRNA的相对表达量;采用流式细胞仪检测并分析CL097处理组和对照组Th1与Th17细胞比例的变化.结果 EAU模型成功建立.实时荧光定量PCR检测结果显示,CL097处理组BMDCs中IL-6、IL-23、IL-1β mRNA的相对表达量明显高于对照组,差异均有统计学意义(t=4.560,P=0.045; t=5.476,P=0.032; t=17.240,P=0.003),而TGF-β mRNA相对表达量明显低于对照组,差异有统计学意义(t=10.410,P=0.009).CL097处理组BMDCs与IRBP1-20-特异性T细胞共培养后,RORγt和IL-17 mRNA相对表达量较对照组明显升高,差异均有统计学意义(t=8.844,P=0.012;t=8.831,P=0.013),而CL097处理组中T-bet、IFN-γmRNA的相对表达量与对照组比较差异均无统计学意义(t=2.078,P=0.173; t=1.082,P=0.393).流式细胞仪检测证实,CL097处理组Th17细胞的百分比为(17.750±4.793)％,明显高于对照组的(10.240±3.173)％,差异有统计学意义(t=4.938,P=0.039),CL097处理组和对照组Th1细胞的百分比分别为(1.123±0.356)％和(1.060±0.384)％,差异无统计学意义(t=2.714,P=0.113).结论 TLR7激动剂CL097促进BMDCs分泌与Th17细胞极化相关的细胞因子,并促进IRBP1-20-特异性Th17细胞的分化.
揹景 研究錶明,Toll樣受體7(TLR7)在自身免疫性疾病中髮揮重要作用,但TLR7在實驗性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)中是否通過樹突狀細胞(DCs)調控輔助性T淋巴細胞17(Th17)的作用機製鮮見報道.目的 探討TLR7激動劑CL097處理的小鼠骨髓樹突狀細胞(BMDCs)對光感受器間維生素A類結閤蛋白(IRBP) 1-20-特異性Th17細胞的影響.方法 採用C57BL/6小鼠股骨和脛骨分離小鼠骨髓細胞,將重組小鼠粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(rmGM-CSF)及重組小鼠白細胞介素-4(rmIL-4)加入培養基在體外定嚮誘導BMDCs,于誘導後第6天在培養基中加入5μg/ml CL097作用8h,對照組加入PBS,採用實時熒光定量PCR技術檢測CL097處理組與對照組BMDCs中IL-6、IL-23、IL-1β及轉化生長因子-β(TGF-β) mRNA的相對錶達量.小鼠腹腔內註射百日咳毒素1μg,註射後2h將IRBP1-20與等容積含有結覈分枝桿菌HR37RA的完全弗氏佐劑充分乳化後主動免疫C57BL/6小鼠,眼底檢查參照Caspi 0 ～4分的標準進行炎癥評分.免疫後第13天取眼毬製作病理切片,囌木精-伊紅染色後行組織病理學檢查,併分離小鼠脾髒及淋巴結中IRBP1.20-特異性T細胞,分彆與CL097處理組及對照組的BMDCs共培養5d,收集細胞,採用實時熒光定量PCR技術檢測2箇組細胞中IL-17、γ榦擾素(IFN-γ)、維甲痠相關覈孤兒受體γt(RORγt)和T細胞中錶達的T盒21轉錄因子(T-bet) mRNA的相對錶達量;採用流式細胞儀檢測併分析CL097處理組和對照組Th1與Th17細胞比例的變化.結果 EAU模型成功建立.實時熒光定量PCR檢測結果顯示,CL097處理組BMDCs中IL-6、IL-23、IL-1β mRNA的相對錶達量明顯高于對照組,差異均有統計學意義(t=4.560,P=0.045; t=5.476,P=0.032; t=17.240,P=0.003),而TGF-β mRNA相對錶達量明顯低于對照組,差異有統計學意義(t=10.410,P=0.009).CL097處理組BMDCs與IRBP1-20-特異性T細胞共培養後,RORγt和IL-17 mRNA相對錶達量較對照組明顯升高,差異均有統計學意義(t=8.844,P=0.012;t=8.831,P=0.013),而CL097處理組中T-bet、IFN-γmRNA的相對錶達量與對照組比較差異均無統計學意義(t=2.078,P=0.173; t=1.082,P=0.393).流式細胞儀檢測證實,CL097處理組Th17細胞的百分比為(17.750±4.793)％,明顯高于對照組的(10.240±3.173)％,差異有統計學意義(t=4.938,P=0.039),CL097處理組和對照組Th1細胞的百分比分彆為(1.123±0.356)％和(1.060±0.384)％,差異無統計學意義(t=2.714,P=0.113).結論 TLR7激動劑CL097促進BMDCs分泌與Th17細胞極化相關的細胞因子,併促進IRBP1-20-特異性Th17細胞的分化.
배경 연구표명,Toll양수체7(TLR7)재자신면역성질병중발휘중요작용,단TLR7재실험성자신면역성포도막염(EAU)중시부통과수돌상세포(DCs)조공보조성T림파세포17(Th17)적작용궤제선견보도.목적 탐토TLR7격동제CL097처리적소서골수수돌상세포(BMDCs)대광감수기간유생소A류결합단백(IRBP) 1-20-특이성Th17세포적영향.방법 채용C57BL/6소서고골화경골분리소서골수세포,장중조소서립세포-거서세포집락자격인자(rmGM-CSF)급중조소서백세포개소-4(rmIL-4)가입배양기재체외정향유도BMDCs,우유도후제6천재배양기중가입5μg/ml CL097작용8h,대조조가입PBS,채용실시형광정량PCR기술검측CL097처리조여대조조BMDCs중IL-6、IL-23、IL-1β급전화생장인자-β(TGF-β) mRNA적상대표체량.소서복강내주사백일해독소1μg,주사후2h장IRBP1-20여등용적함유결핵분지간균HR37RA적완전불씨좌제충분유화후주동면역C57BL/6소서,안저검사삼조Caspi 0 ～4분적표준진행염증평분.면역후제13천취안구제작병리절편,소목정-이홍염색후행조직병이학검사,병분리소서비장급림파결중IRBP1.20-특이성T세포,분별여CL097처리조급대조조적BMDCs공배양5d,수집세포,채용실시형광정량PCR기술검측2개조세포중IL-17、γ간우소(IFN-γ)、유갑산상관핵고인수체γt(RORγt)화T세포중표체적T합21전록인자(T-bet) mRNA적상대표체량;채용류식세포의검측병분석CL097처리조화대조조Th1여Th17세포비례적변화.결과 EAU모형성공건립.실시형광정량PCR검측결과현시,CL097처리조BMDCs중IL-6、IL-23、IL-1β mRNA적상대표체량명현고우대조조,차이균유통계학의의(t=4.560,P=0.045; t=5.476,P=0.032; t=17.240,P=0.003),이TGF-β mRNA상대표체량명현저우대조조,차이유통계학의의(t=10.410,P=0.009).CL097처리조BMDCs여IRBP1-20-특이성T세포공배양후,RORγt화IL-17 mRNA상대표체량교대조조명현승고,차이균유통계학의의(t=8.844,P=0.012;t=8.831,P=0.013),이CL097처리조중T-bet、IFN-γmRNA적상대표체량여대조조비교차이균무통계학의의(t=2.078,P=0.173; t=1.082,P=0.393).류식세포의검측증실,CL097처리조Th17세포적백분비위(17.750±4.793)％,명현고우대조조적(10.240±3.173)％,차이유통계학의의(t=4.938,P=0.039),CL097처리조화대조조Th1세포적백분비분별위(1.123±0.356)％화(1.060±0.384)％,차이무통계학의의(t=2.714,P=0.113).결론 TLR7격동제CL097촉진BMDCs분비여Th17세포겁화상관적세포인자,병촉진IRBP1-20-특이성Th17세포적분화.
