植物病理学报
植物病理學報
식물병이학보
ACTA PHYTOPATHOLOGICA SINICA
2014年
6期
634-640
,共7页
乔奇%秦艳红%张德胜%田雨婷%王爽%王永江%张振臣
喬奇%秦豔紅%張德勝%田雨婷%王爽%王永江%張振臣
교기%진염홍%장덕성%전우정%왕상%왕영강%장진신
甘薯褪绿斑病毒%外壳蛋白%分子变异%原核表达%抗血清制备
甘藷褪綠斑病毒%外殼蛋白%分子變異%原覈錶達%抗血清製備
감서퇴록반병독%외각단백%분자변이%원핵표체%항혈청제비
Sweet potato chlorotic fleck virus%coat protein%molecular variability%prokaryotic expression%antiserum preparation
甘薯褪绿斑病毒(Sweet potato chlorotic fleck virus,SPCFV)是侵染甘薯的主要病毒之一.本研究利用RT-PCR方法克隆了SPCFV中国4个分离物的外壳蛋白(CP)基因.序列分析表明,cp基因全长900bp,编码299个氨基酸残基.4个分离物cp基因的核苷酸序列一致性为78.3％～ 89.9％,推导的氨基酸序列一致性为91.3％～95.7％,存在较大的分子变异.不同分离物CP氨基酸序列N末端的第3-32位氨基酸为多变区.将四川分离物的cp基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,SDS-PAGE分析表明,经IPTG诱导,cp基因在大肠杆菌BL21(DE3)中得到了高效表达.以表达的蛋白为抗原免疫家兔,制备了SPCFV CP的特异性抗血清.ACP-ELISA检测结果表明,制备的抗血清效价达1∶128 000,可用于田间甘薯样品的检测.
甘藷褪綠斑病毒(Sweet potato chlorotic fleck virus,SPCFV)是侵染甘藷的主要病毒之一.本研究利用RT-PCR方法剋隆瞭SPCFV中國4箇分離物的外殼蛋白(CP)基因.序列分析錶明,cp基因全長900bp,編碼299箇氨基痠殘基.4箇分離物cp基因的覈苷痠序列一緻性為78.3％～ 89.9％,推導的氨基痠序列一緻性為91.3％～95.7％,存在較大的分子變異.不同分離物CP氨基痠序列N末耑的第3-32位氨基痠為多變區.將四川分離物的cp基因剋隆到原覈錶達載體pET-28a(+)上,SDS-PAGE分析錶明,經IPTG誘導,cp基因在大腸桿菌BL21(DE3)中得到瞭高效錶達.以錶達的蛋白為抗原免疫傢兔,製備瞭SPCFV CP的特異性抗血清.ACP-ELISA檢測結果錶明,製備的抗血清效價達1∶128 000,可用于田間甘藷樣品的檢測.
감서퇴록반병독(Sweet potato chlorotic fleck virus,SPCFV)시침염감서적주요병독지일.본연구이용RT-PCR방법극륭료SPCFV중국4개분리물적외각단백(CP)기인.서렬분석표명,cp기인전장900bp,편마299개안기산잔기.4개분리물cp기인적핵감산서렬일치성위78.3％～ 89.9％,추도적안기산서렬일치성위91.3％～95.7％,존재교대적분자변이.불동분리물CP안기산서렬N말단적제3-32위안기산위다변구.장사천분리물적cp기인극륭도원핵표체재체pET-28a(+)상,SDS-PAGE분석표명,경IPTG유도,cp기인재대장간균BL21(DE3)중득도료고효표체.이표체적단백위항원면역가토,제비료SPCFV CP적특이성항혈청.ACP-ELISA검측결과표명,제비적항혈청효개체1∶128 000,가용우전간감서양품적검측.
