植物病理学报
植物病理學報
식물병이학보
ACTA PHYTOPATHOLOGICA SINICA
2014年
3期
247-253
,共7页
吴丽民%连永乐%王宗华%汪世华%鲁国东
吳麗民%連永樂%王宗華%汪世華%魯國東
오려민%련영악%왕종화%왕세화%로국동
稻瘟病菌%几丁质酶%多克隆抗体%ELISA
稻瘟病菌%幾丁質酶%多剋隆抗體%ELISA
도온병균%궤정질매%다극륭항체%ELISA
Magnaporthe oryzae%chitinase%antibody preparation%ELISA
为检测几丁质酶的表达,制备稻瘟病菌的一假定几丁质酶多克隆抗体,探索其可能运用.将稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)几丁质酶基因克隆入融合表达载体pET-32a,并在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中进行诱导表达.表达菌株经0.5 mmol/LIPTG诱导4～6h后,用Ni2+-NTA亲和柱纯化蛋白,得到可溶的几丁质酶-His融合蛋白.以该融合蛋白免疫新西兰雄兔,制备多克隆抗体.ELISA分析表明该抗体效价达1:204800,特异性良好.用该抗体ELISA检测了稻瘟病菌4个不同田间菌株中,不同的菌株表达量不同.对稻瘟病菌侵染水稻3、5和7d后的病叶进行抗原Western验证,结果表明,稻瘟病菌不同的侵染时间其几丁质酶表达量有明显差异.几丁质酶表达的差异是否与菌株间致病型等生物学和生理学差异有关,目前正在进一步研究.
為檢測幾丁質酶的錶達,製備稻瘟病菌的一假定幾丁質酶多剋隆抗體,探索其可能運用.將稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)幾丁質酶基因剋隆入融閤錶達載體pET-32a,併在大腸桿菌Escherichia coli BL21(DE3)中進行誘導錶達.錶達菌株經0.5 mmol/LIPTG誘導4～6h後,用Ni2+-NTA親和柱純化蛋白,得到可溶的幾丁質酶-His融閤蛋白.以該融閤蛋白免疫新西蘭雄兔,製備多剋隆抗體.ELISA分析錶明該抗體效價達1:204800,特異性良好.用該抗體ELISA檢測瞭稻瘟病菌4箇不同田間菌株中,不同的菌株錶達量不同.對稻瘟病菌侵染水稻3、5和7d後的病葉進行抗原Western驗證,結果錶明,稻瘟病菌不同的侵染時間其幾丁質酶錶達量有明顯差異.幾丁質酶錶達的差異是否與菌株間緻病型等生物學和生理學差異有關,目前正在進一步研究.
위검측궤정질매적표체,제비도온병균적일가정궤정질매다극륭항체,탐색기가능운용.장도온병균(Magnaporthe oryzae)궤정질매기인극륭입융합표체재체pET-32a,병재대장간균Escherichia coli BL21(DE3)중진행유도표체.표체균주경0.5 mmol/LIPTG유도4～6h후,용Ni2+-NTA친화주순화단백,득도가용적궤정질매-His융합단백.이해융합단백면역신서란웅토,제비다극륭항체.ELISA분석표명해항체효개체1:204800,특이성량호.용해항체ELISA검측료도온병균4개불동전간균주중,불동적균주표체량불동.대도온병균침염수도3、5화7d후적병협진행항원Western험증,결과표명,도온병균불동적침염시간기궤정질매표체량유명현차이.궤정질매표체적차이시부여균주간치병형등생물학화생이학차이유관,목전정재진일보연구.
