成都医学院学报
成都醫學院學報
성도의학원학보
JOURNAL OF CHENGDU MEDICAL COLLEGE
2015年
1期
7-11
,共5页
刘月明%刘海荣%杨汀%陈文海%张玮%刘漪沦
劉月明%劉海榮%楊汀%陳文海%張瑋%劉漪淪
류월명%류해영%양정%진문해%장위%류의륜
内皮细胞高表达脂多糖相关因子1%金属硫蛋白2A%内毒素%蛋白质相互作用
內皮細胞高錶達脂多糖相關因子1%金屬硫蛋白2A%內毒素%蛋白質相互作用
내피세포고표체지다당상관인자1%금속류단백2A%내독소%단백질상호작용
EOLA1%MT2A%LPS%Protein-Protein interaction
目的 研究内皮细胞高表达脂多糖相关因子1(EOLA1)与金属硫蛋白2A(MT2A)的相互作用关系,明确其相互作用位点及上下游关系.方法 构建EGFP-EOLA1融合表达载体,转染HUVEC细胞,应用免疫荧光共定位成像技术观察EOLA1和MT2A在HUVEC中的共定位情况;应用截短突变和酵母双杂交确定EOLA1和MT2A的相互作用位置;应用RNAi技术建立EOLA1/MT2A上调和下调的HUVEC细胞模型,观测模型细胞EOLA1/MT2A的表达情况.结果 EOLA1和MT2A在HUVEC中存在共定位现象,共定位主要发生在核膜周围;酵母双杂交和免疫共沉淀实验结果显示,EOLA1的截短突变体1～77氨基酸(aa)片段和MT2A无结合活性,1～115aa片段及1～158aa片段和MT2A有结合活性.EOLA1上调/下调表达时MT2A同时相应上调/下调表达,MT2A的上调和下调表达对EOLA1表达无明显影响.结论 EOLA1和MT2A在HUVEC细胞内存在相互作用,相互作用位点位于EOLA1ORF的100～113功能域,EOLA1可以调控MT2A在HUVEC中的表达.
目的 研究內皮細胞高錶達脂多糖相關因子1(EOLA1)與金屬硫蛋白2A(MT2A)的相互作用關繫,明確其相互作用位點及上下遊關繫.方法 構建EGFP-EOLA1融閤錶達載體,轉染HUVEC細胞,應用免疫熒光共定位成像技術觀察EOLA1和MT2A在HUVEC中的共定位情況;應用截短突變和酵母雙雜交確定EOLA1和MT2A的相互作用位置;應用RNAi技術建立EOLA1/MT2A上調和下調的HUVEC細胞模型,觀測模型細胞EOLA1/MT2A的錶達情況.結果 EOLA1和MT2A在HUVEC中存在共定位現象,共定位主要髮生在覈膜週圍;酵母雙雜交和免疫共沉澱實驗結果顯示,EOLA1的截短突變體1～77氨基痠(aa)片段和MT2A無結閤活性,1～115aa片段及1～158aa片段和MT2A有結閤活性.EOLA1上調/下調錶達時MT2A同時相應上調/下調錶達,MT2A的上調和下調錶達對EOLA1錶達無明顯影響.結論 EOLA1和MT2A在HUVEC細胞內存在相互作用,相互作用位點位于EOLA1ORF的100～113功能域,EOLA1可以調控MT2A在HUVEC中的錶達.
목적 연구내피세포고표체지다당상관인자1(EOLA1)여금속류단백2A(MT2A)적상호작용관계,명학기상호작용위점급상하유관계.방법 구건EGFP-EOLA1융합표체재체,전염HUVEC세포,응용면역형광공정위성상기술관찰EOLA1화MT2A재HUVEC중적공정위정황;응용절단돌변화효모쌍잡교학정EOLA1화MT2A적상호작용위치;응용RNAi기술건립EOLA1/MT2A상조화하조적HUVEC세포모형,관측모형세포EOLA1/MT2A적표체정황.결과 EOLA1화MT2A재HUVEC중존재공정위현상,공정위주요발생재핵막주위;효모쌍잡교화면역공침정실험결과현시,EOLA1적절단돌변체1～77안기산(aa)편단화MT2A무결합활성,1～115aa편단급1～158aa편단화MT2A유결합활성.EOLA1상조/하조표체시MT2A동시상응상조/하조표체,MT2A적상조화하조표체대EOLA1표체무명현영향.결론 EOLA1화MT2A재HUVEC세포내존재상호작용,상호작용위점위우EOLA1ORF적100～113공능역,EOLA1가이조공MT2A재HUVEC중적표체.
