CAJ | 학술논문

目的：构建介导 RECQL4 RNA 干扰的 shRNA 慢病毒表达载体。方法将人工合成的 RECQL4 siR－NA 经 PCR 扩增后与线化的 pLKO．1慢病毒表达载体连接，经测序鉴定后，将 pLKO．1－RECQL4－shRNA 与慢病毒包装质粒共转染入 HEK －293T 细胞，产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度。体外感染人结肠癌细胞 RKO 后，实时定量 PCR 和 Western blot 检测 RECQL4 mRNA 和蛋白的沉默效果。设置未加入任何慢病毒表达载体的 RKO 细胞为未感染组，感染 pLKO．1－scramble －shRNA 慢病毒载体为阴性对照组。结果基因测序结果证实成功构建 pL－KO．1－RECQL4－shRNA 慢病毒表达载体。测定包装后的慢病毒颗粒滴度为6.70×107 IU／mL。感染 RKO 细胞后，RECQL4的 mRNA 和蛋白表达量均低于阴性组和未感染组。结论成功构建靶向 RECQL4基因的 shRNA 慢病毒表达载体，可有效抑制人结肠癌 RKO 细胞 RECQL4 mRNA 和蛋白的表达。
목적：구건개도 RECQL4 RNA 간우적 shRNA 만병독표체재체。방법장인공합성적 RECQL4 siR－NA 경 PCR 확증후여선화적 pLKO．1만병독표체재체련접，경측서감정후，장 pLKO．1－RECQL4－shRNA 여만병독포장질립공전염입 HEK －293T 세포，산생만병독과립병측정병독적도。체외감염인결장암세포 RKO 후，실시정량 PCR 화 Western blot 검측 RECQL4 mRNA 화단백적침묵효과。설치미가입임하만병독표체재체적 RKO 세포위미감염조，감염 pLKO．1－scramble －shRNA 만병독재체위음성대조조。결과기인측서결과증실성공구건 pL－KO．1－RECQL4－shRNA 만병독표체재체。측정포장후적만병독과립적도위6.70×107 IU／mL。감염 RKO 세포후，RECQL4적 mRNA 화단백표체량균저우음성조화미감염조。결론성공구건파향 RECQL4기인적 shRNA 만병독표체재체，가유효억제인결장암 RKO 세포 RECQL4 mRNA 화단백적표체。