安徽医药
安徽醫藥
안휘의약
ANHUI MEDICAL AND PHARMACEUTICAL JOURNAL
2015年
4期
636-639,640
,共5页
多发性骨髓瘤%雷帕霉素%3-甲基腺嘌呤%自噬%细胞凋亡
多髮性骨髓瘤%雷帕黴素%3-甲基腺嘌呤%自噬%細胞凋亡
다발성골수류%뢰파매소%3-갑기선표령%자서%세포조망
multiple myloma%rapamycin%3-MA%autophagy%cell apoptosis
目的：探讨自噬（ autophagy）对正常培养多发性骨髓瘤（ Multiple myeloma，MM）细胞株增殖的影响。方法 MM细胞株U266在正常培养条件下分别加入雷帕霉素和3－甲基腺嘌呤（3-methyladenine，3-MA），以正常血清培养U266细胞及淋巴瘤Jurkat细胞株为对照组；分别检测细胞的增殖及凋亡水平；单丹磺酰尸胺（ monodansylcadaverine ，MDC）荧光染色法检测细胞自噬水平；逆转录PCR检测自噬相关基因mtor、Beclin1、Atg5在细胞内水平，蛋白质印迹法检测细胞内自噬相关蛋白轻链3I／Ⅱ（ LC3I／Ⅱ）含量。结果 U266细胞及Jurkat细胞内均存在自噬，但前者水平高于后者。雷帕霉素可诱导MM细胞发生自噬，3-MA对自噬有双重作用。雷帕霉素及3-MA下调细胞增殖水平。雷帕霉素及3-MA处理24 h可上调正常培养条件下U266细胞凋亡水平（1．7％±0．2％，19．1％±1．0％和16．8％±0．61％）。延长培养时间至72 h，雷帕霉素处理组凋亡水平无明显变化（16．9％±0．48％）。而3-MA处理组凋亡水平下降（9．0％±0．70％）。结论 MM细胞株内会存在一定水平的自噬，并通过实验证明其高于淋巴瘤Jurkat细胞株的自噬水平。在正常培养条件下加入了雷帕霉素及3-MA可抑制MM细胞的增殖，并可诱导细胞凋亡。
目的：探討自噬（ autophagy）對正常培養多髮性骨髓瘤（ Multiple myeloma，MM）細胞株增殖的影響。方法 MM細胞株U266在正常培養條件下分彆加入雷帕黴素和3－甲基腺嘌呤（3-methyladenine，3-MA），以正常血清培養U266細胞及淋巴瘤Jurkat細胞株為對照組；分彆檢測細胞的增殖及凋亡水平；單丹磺酰尸胺（ monodansylcadaverine ，MDC）熒光染色法檢測細胞自噬水平；逆轉錄PCR檢測自噬相關基因mtor、Beclin1、Atg5在細胞內水平，蛋白質印跡法檢測細胞內自噬相關蛋白輕鏈3I／Ⅱ（ LC3I／Ⅱ）含量。結果 U266細胞及Jurkat細胞內均存在自噬，但前者水平高于後者。雷帕黴素可誘導MM細胞髮生自噬，3-MA對自噬有雙重作用。雷帕黴素及3-MA下調細胞增殖水平。雷帕黴素及3-MA處理24 h可上調正常培養條件下U266細胞凋亡水平（1．7％±0．2％，19．1％±1．0％和16．8％±0．61％）。延長培養時間至72 h，雷帕黴素處理組凋亡水平無明顯變化（16．9％±0．48％）。而3-MA處理組凋亡水平下降（9．0％±0．70％）。結論 MM細胞株內會存在一定水平的自噬，併通過實驗證明其高于淋巴瘤Jurkat細胞株的自噬水平。在正常培養條件下加入瞭雷帕黴素及3-MA可抑製MM細胞的增殖，併可誘導細胞凋亡。
목적：탐토자서（ autophagy）대정상배양다발성골수류（ Multiple myeloma，MM）세포주증식적영향。방법 MM세포주U266재정상배양조건하분별가입뢰파매소화3－갑기선표령（3-methyladenine，3-MA），이정상혈청배양U266세포급림파류Jurkat세포주위대조조；분별검측세포적증식급조망수평；단단광선시알（ monodansylcadaverine ，MDC）형광염색법검측세포자서수평；역전록PCR검측자서상관기인mtor、Beclin1、Atg5재세포내수평，단백질인적법검측세포내자서상관단백경련3I／Ⅱ（ LC3I／Ⅱ）함량。결과 U266세포급Jurkat세포내균존재자서，단전자수평고우후자。뢰파매소가유도MM세포발생자서，3-MA대자서유쌍중작용。뢰파매소급3-MA하조세포증식수평。뢰파매소급3-MA처리24 h가상조정상배양조건하U266세포조망수평（1．7％±0．2％，19．1％±1．0％화16．8％±0．61％）。연장배양시간지72 h，뢰파매소처리조조망수평무명현변화（16．9％±0．48％）。이3-MA처리조조망수평하강（9．0％±0．70％）。결론 MM세포주내회존재일정수평적자서，병통과실험증명기고우림파류Jurkat세포주적자서수평。재정상배양조건하가입료뢰파매소급3-MA가억제MM세포적증식，병가유도세포조망。
Objective To investigate the influence of autophagy on the proliferation of multiple myeloma ( MM) cells under normal cul-ture condition.Methods Multiple myeloma ( MM) cell line U266 was incubated with rapamycin or 3-MA respectively.Normally cul-tured Jurkat and U266 cell were used as control group.We determined the proliferation and apoptosis of cells respectively.Monodansyl-cadaverine( MDC) staining was employed to detect the autophagy.Reverse transcription PCR detected cells autophagy related genes mTOR,Beclin1,Atg5 level.Western blot was employed to detect the expression of protein LC3I /LCII.Results Autophagy level in U266 cells was higher than Jurkat cells.Rapamycin induced autophagy in U266 cell .3-MA showed inhibitory effect on autophagy for a short time.Rapamycin or 3-MA could induce cell apoptosis when incubated in normal culture condition for 24 hour (19.1%±1.0 %and 16.8%±0.61%,control group 1.7%±0.2%).Prolonged incubation time to 72 hours,the apoptosis level of rapamycintreatment group had no difference(16.9%±0.48%).But the levels of apoptosis of 3-MA group was decreased(9.0%±0.70%).Conclusion There was a basic level of autophagy in MM cell,and it was higher than those in the Jurkat cells.Rapamycin and 3-MA both inhibited the proliferation of MM cell and induced cell apoptosis.
