中国药理学与毒理学杂志
中國藥理學與毒理學雜誌
중국약이학여독이학잡지
CHINESE JOURNAL OF PHARMACOLOGY AND TOXICOLOGY
2015年
1期
92-97
,共6页
安磊%李静%金增亮%李云峰%李锦%张有志
安磊%李靜%金增亮%李雲峰%李錦%張有誌
안뢰%리정%금증량%리운봉%리금%장유지
去甲肾上腺素转运蛋白%HEK293细胞%抗抑郁药%去甲肾上腺素%细胞转染
去甲腎上腺素轉運蛋白%HEK293細胞%抗抑鬱藥%去甲腎上腺素%細胞轉染
거갑신상선소전운단백%HEK293세포%항억욱약%거갑신상선소%세포전염
norepinephrine transporter%HEK293 cell%antidepressant%norepinephrine%transfection
目的 构建人源去甲肾上腺素转运蛋白(hNET)稳定表达细胞系,并对细胞系hNET的结合和重摄取功能进行研究.方法 采用脂质体转染法将hNET转染于母细胞-人胚肾(HEK) 293细胞(HEK293-hNET);采用RT-PCR和Western蛋白质印迹法在基因和蛋白水平对HEK293-hNET细胞系进行鉴定和稳定性验证;采用放射性配基结合实验检测HEK293-hNET的结合和重摄取功能.并采用三环类抗抑郁药地昔帕明(DIM)和5-羟色胺/去甲肾上腺素双重重摄取抑制剂度洛西汀(DLX),在0～1×10-4 mol·L-1浓度梯度范围绘制药物与hNET的结合与重摄取抑制曲线,进一步验证HEK293-hNET细胞系的结合和重摄取功能.结果 RT-PCR和Western蛋白质印迹实验结果表明,所建立的HEK293-hNET细胞系在15代内均稳定表达hNET;放射性配基结合实验表明,HEK293-hNET细胞具有内源性hNET的结合和重摄取功能.并且,DIM和DLX与HEK293-hNET细胞中hNET具有明显的特异性结合(Ki值分别为2.45和3.40 nmol· L-1),并可显著抑制hNET对去甲肾上腺素的重摄取作用(IC50分别为5.78和10.23 nmol· L-1).结论 成功建立的可稳定表达hNET的HEK293-hNET细胞系具有内源性hNET的结合和重摄取功能,可用于hNET靶标药物研究.
目的 構建人源去甲腎上腺素轉運蛋白(hNET)穩定錶達細胞繫,併對細胞繫hNET的結閤和重攝取功能進行研究.方法 採用脂質體轉染法將hNET轉染于母細胞-人胚腎(HEK) 293細胞(HEK293-hNET);採用RT-PCR和Western蛋白質印跡法在基因和蛋白水平對HEK293-hNET細胞繫進行鑒定和穩定性驗證;採用放射性配基結閤實驗檢測HEK293-hNET的結閤和重攝取功能.併採用三環類抗抑鬱藥地昔帕明(DIM)和5-羥色胺/去甲腎上腺素雙重重攝取抑製劑度洛西汀(DLX),在0～1×10-4 mol·L-1濃度梯度範圍繪製藥物與hNET的結閤與重攝取抑製麯線,進一步驗證HEK293-hNET細胞繫的結閤和重攝取功能.結果 RT-PCR和Western蛋白質印跡實驗結果錶明,所建立的HEK293-hNET細胞繫在15代內均穩定錶達hNET;放射性配基結閤實驗錶明,HEK293-hNET細胞具有內源性hNET的結閤和重攝取功能.併且,DIM和DLX與HEK293-hNET細胞中hNET具有明顯的特異性結閤(Ki值分彆為2.45和3.40 nmol· L-1),併可顯著抑製hNET對去甲腎上腺素的重攝取作用(IC50分彆為5.78和10.23 nmol· L-1).結論 成功建立的可穩定錶達hNET的HEK293-hNET細胞繫具有內源性hNET的結閤和重攝取功能,可用于hNET靶標藥物研究.
목적 구건인원거갑신상선소전운단백(hNET)은정표체세포계,병대세포계hNET적결합화중섭취공능진행연구.방법 채용지질체전염법장hNET전염우모세포-인배신(HEK) 293세포(HEK293-hNET);채용RT-PCR화Western단백질인적법재기인화단백수평대HEK293-hNET세포계진행감정화은정성험증;채용방사성배기결합실험검측HEK293-hNET적결합화중섭취공능.병채용삼배류항억욱약지석파명(DIM)화5-간색알/거갑신상선소쌍중중섭취억제제도락서정(DLX),재0～1×10-4 mol·L-1농도제도범위회제약물여hNET적결합여중섭취억제곡선,진일보험증HEK293-hNET세포계적결합화중섭취공능.결과 RT-PCR화Western단백질인적실험결과표명,소건립적HEK293-hNET세포계재15대내균은정표체hNET;방사성배기결합실험표명,HEK293-hNET세포구유내원성hNET적결합화중섭취공능.병차,DIM화DLX여HEK293-hNET세포중hNET구유명현적특이성결합(Ki치분별위2.45화3.40 nmol· L-1),병가현저억제hNET대거갑신상선소적중섭취작용(IC50분별위5.78화10.23 nmol· L-1).결론 성공건립적가은정표체hNET적HEK293-hNET세포계구유내원성hNET적결합화중섭취공능,가용우hNET파표약물연구.
