CAJ | 학술논문

Wap65-2(warm temperature acclimation related 65 kD protein-2)是在硬骨鱼类中发现的一种血浆糖蛋白,与细菌感染引起的免疫应答密切相关.本研究通过大黄鱼(Larimichthys crocea)肝组织转录组测序获得了大黄鱼LcWap6-2基因全长cDNA(GenBank登录号:KJ412463).结果表明,LcWap65-2基因由1 585个核苷酸组成,包含一个大的开放阅读框,编码432个氨基酸,预测分子量为48.84kD,等电点为5.36,N末端20个氨基酸为信号肽.氨基酸序列多重比对分析表明,LcWap65-2具有鱼类Wap65-2的典型结构特征,LcWap65-2与鮸鱼(Miichthys miiuy)Wap65-2同源性最高(87.4％);系统进化树分析表明,鱼类Wap65-2形成一个大簇,LcWap65-2与鮸鱼Wap65-2进化相关性最高.基因组结构分析表明,LcWap65-2基因组DNA序列(GenBank登录号:KJ412464)由10个外显子和9个内含子组成.实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qRT-PCR)结果显示,LcWap65-2 mRNA主要在健康大黄鱼肝组织中表达,在脑中有少量表达;溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)感染后大黄鱼肝组织中LcWap65-2 mRNA表达量显著上调(P＜0.05),在感染8h时达到峰值.原核表达大黄鱼Wap65-2成熟肽(LcWap65-2m),并制备了抗血清,Western blot分析表明,溶藻弧菌感染后大黄鱼血清Wap65-2表达量在4h时无明显变化,8h后显著上调(P＜0.05).大黄鱼Wap65-2基因及蛋白的表达与溶藻弧菌感染过程紧密相关,揭示其可能在鱼类抗感染免疫应答中发挥重要作用.研究结果为进一步研究鱼类Wap65-2的功能及其在病原菌感染免疫中的分子机制提供基础资料.
Wap65-2(warm temperature acclimation related 65 kD protein-2)시재경골어류중발현적일충혈장당단백,여세균감염인기적면역응답밀절상관.본연구통과대황어(Larimichthys crocea)간조직전록조측서획득료대황어LcWap6-2기인전장cDNA(GenBank등록호:KJ412463).결과표명,LcWap65-2기인유1 585개핵감산조성,포함일개대적개방열독광,편마432개안기산,예측분자량위48.84kD,등전점위5.36,N말단20개안기산위신호태.안기산서렬다중비대분석표명,LcWap65-2구유어류Wap65-2적전형결구특정,LcWap65-2여면어(Miichthys miiuy)Wap65-2동원성최고(87.4％);계통진화수분석표명,어류Wap65-2형성일개대족,LcWap65-2여면어Wap65-2진화상관성최고.기인조결구분석표명,LcWap65-2기인조DNA서렬(GenBank등록호:KJ412464)유10개외현자화9개내함자조성.실시형광정량PCR(Real-time quantitative PCR,qRT-PCR)결과현시,LcWap65-2 mRNA주요재건강대황어간조직중표체,재뇌중유소량표체;용조호균(Vibrio alginolyticus)감염후대황어간조직중LcWap65-2 mRNA표체량현저상조(P＜0.05),재감염8h시체도봉치.원핵표체대황어Wap65-2성숙태(LcWap65-2m),병제비료항혈청,Western blot분석표명,용조호균감염후대황어혈청Wap65-2표체량재4h시무명현변화,8h후현저상조(P＜0.05).대황어Wap65-2기인급단백적표체여용조호균감염과정긴밀상관,게시기가능재어류항감염면역응답중발휘중요작용.연구결과위진일보연구어류Wap65-2적공능급기재병원균감염면역중적분자궤제제공기출자료.