农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2015年
5期
683-689
,共7页
刘易科%张菲菲%廖玉才%赵正喜%李和平
劉易科%張菲菲%廖玉纔%趙正喜%李和平
류역과%장비비%료옥재%조정희%리화평
普通小麦%内标准基因%PSG719%定量PCR%转基因小麦
普通小麥%內標準基因%PSG719%定量PCR%轉基因小麥
보통소맥%내표준기인%PSG719%정량PCR%전기인소맥
Common wheat%Endogenous reference gene%PSG719%Real-time PCR%Transgenic wheat
利用定量PCR检测和分析转基因作物外源基因时,首先需要一种具有种属特异性、品种间不显示等位基因变化和较低拷贝数的内标准基因作为对照.本研究通过生物信息学方法和现有文献,筛选到小麦PSG719基因(GenBank登录号:FJ497025.1)具有特异性强以及拷贝数低的特点;基于该基因特异区段设计的引物,对包括硬粒小麦在内的16个物种的定性PCR鉴定和16个不同生态区小麦品种的定量PCR检测结果表明,该基因具有普通小麦的特异性和品种间的稳定性.该基因的定性PCR检测极限为2个拷贝的普通小麦基因组;定量PCR检测极限为2个拷贝,定量极限为5个拷贝;这些极限值在已有的小麦内标准基因中均处于最低水平,证明该基因PCR反应的灵敏度较高,可以对小麦转基因成分含量较低的样品进行检测和定量.以经梯度稀释的小麦基因组DNA为模板,定量PCR标准曲线斜率-3.395,相关系数R2为0.999,表明该基因的定量PCR体系适用转基因小麦样品的定量分析.这些结果表明,普通小麦内标准基因PSG719是一个理想的内标准基因,可以用于转基因小麦的定性和定量检测.本研究为将来转基因小麦标识制度的建立提供了一种可靠的定量检测体系.
利用定量PCR檢測和分析轉基因作物外源基因時,首先需要一種具有種屬特異性、品種間不顯示等位基因變化和較低拷貝數的內標準基因作為對照.本研究通過生物信息學方法和現有文獻,篩選到小麥PSG719基因(GenBank登錄號:FJ497025.1)具有特異性彊以及拷貝數低的特點;基于該基因特異區段設計的引物,對包括硬粒小麥在內的16箇物種的定性PCR鑒定和16箇不同生態區小麥品種的定量PCR檢測結果錶明,該基因具有普通小麥的特異性和品種間的穩定性.該基因的定性PCR檢測極限為2箇拷貝的普通小麥基因組;定量PCR檢測極限為2箇拷貝,定量極限為5箇拷貝;這些極限值在已有的小麥內標準基因中均處于最低水平,證明該基因PCR反應的靈敏度較高,可以對小麥轉基因成分含量較低的樣品進行檢測和定量.以經梯度稀釋的小麥基因組DNA為模闆,定量PCR標準麯線斜率-3.395,相關繫數R2為0.999,錶明該基因的定量PCR體繫適用轉基因小麥樣品的定量分析.這些結果錶明,普通小麥內標準基因PSG719是一箇理想的內標準基因,可以用于轉基因小麥的定性和定量檢測.本研究為將來轉基因小麥標識製度的建立提供瞭一種可靠的定量檢測體繫.
이용정량PCR검측화분석전기인작물외원기인시,수선수요일충구유충속특이성、품충간불현시등위기인변화화교저고패수적내표준기인작위대조.본연구통과생물신식학방법화현유문헌,사선도소맥PSG719기인(GenBank등록호:FJ497025.1)구유특이성강이급고패수저적특점;기우해기인특이구단설계적인물,대포괄경립소맥재내적16개물충적정성PCR감정화16개불동생태구소맥품충적정량PCR검측결과표명,해기인구유보통소맥적특이성화품충간적은정성.해기인적정성PCR검측겁한위2개고패적보통소맥기인조;정량PCR검측겁한위2개고패,정량겁한위5개고패;저사겁한치재이유적소맥내표준기인중균처우최저수평,증명해기인PCR반응적령민도교고,가이대소맥전기인성분함량교저적양품진행검측화정량.이경제도희석적소맥기인조DNA위모판,정량PCR표준곡선사솔-3.395,상관계수R2위0.999,표명해기인적정량PCR체계괄용전기인소맥양품적정량분석.저사결과표명,보통소맥내표준기인PSG719시일개이상적내표준기인,가이용우전기인소맥적정성화정량검측.본연구위장래전기인소맥표식제도적건립제공료일충가고적정량검측체계.
