中国实验方剂学杂志
中國實驗方劑學雜誌
중국실험방제학잡지
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL TRADITIONAL MEDICAL FORMULAE
2015年
6期
86-90
,共5页
邱亚玲%秦民坚%戴轶群%及佳%谢国勇%吴刚%朱艳
邱亞玲%秦民堅%戴軼群%及佳%謝國勇%吳剛%硃豔
구아령%진민견%대질군%급가%사국용%오강%주염
猫豆%ISSR分子标记%遗传关系%聚类分析
貓豆%ISSR分子標記%遺傳關繫%聚類分析
묘두%ISSR분자표기%유전관계%취류분석
Mucuna pruriens%inter-simple sequence repeat molecular markers%genetic relationships%cluster analysis
目的:从DNA分子水平分析不同产地猫豆的遗传多样性,探索其相互之间的亲缘关系.方法:采用简单重复序列区间(ISSR)分子标记技术对11份不同产地猫豆进行聚类分析,ISSR-聚合酶链式反应(PCR)扩增程序为94℃预变性4 min,94℃变性45 s,48 ～ 54℃退火1 min,72℃延伸90 s,40个循环,72℃延伸7 min,10 ℃保存.在单因素试验基础上,通过L16(45)正交试验考察ISSR-PCR的5个主要因素(Mg2,引物,dNTPs,模板DNA及Taq聚合酶).运用Ntsys-pc软件和Popgene软件对11份样品进行分析.结果:ISSR-PCR反应最佳体系为模板DNA 20 ng,0.3μmol·L-1引物,0.15 mmol·L-1的dNTPs,2.4 mmol·L-1 MgCl2,1 UTaq DNA聚合酶(5 U· μL-1),PCR缓冲液2μL,加入灭菌水至20μL.从40条ISSR引物中筛选出10条扩增条带清晰且重复性良好的引物,共扩增出97个条带,其中多态性条带25条,多态性位点比率25.8％.11份猫豆资源间的遗传相似系数0.866 ～0.969 1,聚类分为3个大类群.结论:猫豆遗传差异与地理分布有一定关系,但整体遗传变异小,遗传稳定性强.
目的:從DNA分子水平分析不同產地貓豆的遺傳多樣性,探索其相互之間的親緣關繫.方法:採用簡單重複序列區間(ISSR)分子標記技術對11份不同產地貓豆進行聚類分析,ISSR-聚閤酶鏈式反應(PCR)擴增程序為94℃預變性4 min,94℃變性45 s,48 ～ 54℃退火1 min,72℃延伸90 s,40箇循環,72℃延伸7 min,10 ℃保存.在單因素試驗基礎上,通過L16(45)正交試驗攷察ISSR-PCR的5箇主要因素(Mg2,引物,dNTPs,模闆DNA及Taq聚閤酶).運用Ntsys-pc軟件和Popgene軟件對11份樣品進行分析.結果:ISSR-PCR反應最佳體繫為模闆DNA 20 ng,0.3μmol·L-1引物,0.15 mmol·L-1的dNTPs,2.4 mmol·L-1 MgCl2,1 UTaq DNA聚閤酶(5 U· μL-1),PCR緩遲液2μL,加入滅菌水至20μL.從40條ISSR引物中篩選齣10條擴增條帶清晰且重複性良好的引物,共擴增齣97箇條帶,其中多態性條帶25條,多態性位點比率25.8％.11份貓豆資源間的遺傳相似繫數0.866 ～0.969 1,聚類分為3箇大類群.結論:貓豆遺傳差異與地理分佈有一定關繫,但整體遺傳變異小,遺傳穩定性彊.
목적:종DNA분자수평분석불동산지묘두적유전다양성,탐색기상호지간적친연관계.방법:채용간단중복서렬구간(ISSR)분자표기기술대11빈불동산지묘두진행취류분석,ISSR-취합매련식반응(PCR)확증정서위94℃예변성4 min,94℃변성45 s,48 ～ 54℃퇴화1 min,72℃연신90 s,40개순배,72℃연신7 min,10 ℃보존.재단인소시험기출상,통과L16(45)정교시험고찰ISSR-PCR적5개주요인소(Mg2,인물,dNTPs,모판DNA급Taq취합매).운용Ntsys-pc연건화Popgene연건대11빈양품진행분석.결과:ISSR-PCR반응최가체계위모판DNA 20 ng,0.3μmol·L-1인물,0.15 mmol·L-1적dNTPs,2.4 mmol·L-1 MgCl2,1 UTaq DNA취합매(5 U· μL-1),PCR완충액2μL,가입멸균수지20μL.종40조ISSR인물중사선출10조확증조대청석차중복성량호적인물,공확증출97개조대,기중다태성조대25조,다태성위점비솔25.8％.11빈묘두자원간적유전상사계수0.866 ～0.969 1,취류분위3개대류군.결론:묘두유전차이여지리분포유일정관계,단정체유전변이소,유전은정성강.
