福建医药杂志
福建醫藥雜誌
복건의약잡지
FUJIAN MEDICAL JOURNAL
2015年
2期
76-80
,共5页
SARI%真核表达%HeLa细胞%细胞定位
SARI%真覈錶達%HeLa細胞%細胞定位
SARI%진핵표체%HeLa세포%세포정위
目的 构建人SARI基因真核表达载体,并建立稳定转染的HeLa细胞系.方法 采用RT-PCR技术从正常人外周血单个核细胞cDNA文库中扩增SARI基因序列,连接插入至pCMV-N-Flag真核表达载体,并对重组质粒进行酶切及测序鉴定;阳离子聚合物介导重组质粒转染HeLa细胞后,用G418抗生素筛选稳定转染的细胞系.间接免疫荧光检测Flag-SARI融合蛋白在HeLa细胞系中的表达定位.RT-PCR及Western blot检测SARI mRNA及蛋白的表达变化.结果 双酶切和DNA测序表明pCMV-Flag-SARI真核表达质粒构建成功.经G418筛选后,RT-PCR和Western blot表明,转染重组质粒的HeLa细胞系中SARI mRNA及蛋白的表达明显升高.间接免疫荧光结果显示,Flag-SARI融合蛋白在HeLa细胞系的胞质和胞核中均有表达,且胞质荧光信号强于胞核.结论 成功构建pCMV-Flag-SARI真核表达载体,表达的Flag-SARI蛋白主要定位于HeLa细胞系的胞质中.
目的 構建人SARI基因真覈錶達載體,併建立穩定轉染的HeLa細胞繫.方法 採用RT-PCR技術從正常人外週血單箇覈細胞cDNA文庫中擴增SARI基因序列,連接插入至pCMV-N-Flag真覈錶達載體,併對重組質粒進行酶切及測序鑒定;暘離子聚閤物介導重組質粒轉染HeLa細胞後,用G418抗生素篩選穩定轉染的細胞繫.間接免疫熒光檢測Flag-SARI融閤蛋白在HeLa細胞繫中的錶達定位.RT-PCR及Western blot檢測SARI mRNA及蛋白的錶達變化.結果 雙酶切和DNA測序錶明pCMV-Flag-SARI真覈錶達質粒構建成功.經G418篩選後,RT-PCR和Western blot錶明,轉染重組質粒的HeLa細胞繫中SARI mRNA及蛋白的錶達明顯升高.間接免疫熒光結果顯示,Flag-SARI融閤蛋白在HeLa細胞繫的胞質和胞覈中均有錶達,且胞質熒光信號彊于胞覈.結論 成功構建pCMV-Flag-SARI真覈錶達載體,錶達的Flag-SARI蛋白主要定位于HeLa細胞繫的胞質中.
목적 구건인SARI기인진핵표체재체,병건립은정전염적HeLa세포계.방법 채용RT-PCR기술종정상인외주혈단개핵세포cDNA문고중확증SARI기인서렬,련접삽입지pCMV-N-Flag진핵표체재체,병대중조질립진행매절급측서감정;양리자취합물개도중조질립전염HeLa세포후,용G418항생소사선은정전염적세포계.간접면역형광검측Flag-SARI융합단백재HeLa세포계중적표체정위.RT-PCR급Western blot검측SARI mRNA급단백적표체변화.결과 쌍매절화DNA측서표명pCMV-Flag-SARI진핵표체질립구건성공.경G418사선후,RT-PCR화Western blot표명,전염중조질립적HeLa세포계중SARI mRNA급단백적표체명현승고.간접면역형광결과현시,Flag-SARI융합단백재HeLa세포계적포질화포핵중균유표체,차포질형광신호강우포핵.결론 성공구건pCMV-Flag-SARI진핵표체재체,표체적Flag-SARI단백주요정위우HeLa세포계적포질중.
