中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2015年
4期
246-249
,共4页
曲泽慧%高飞%李丽薇%姜一峰%虞凌雪%周艳君%郑海红%童光志
麯澤慧%高飛%李麗薇%薑一峰%虞凌雪%週豔君%鄭海紅%童光誌
곡택혜%고비%리려미%강일봉%우릉설%주염군%정해홍%동광지
猪繁殖与呼吸综合征病毒%重组病毒%增强性绿色荧光蛋白
豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒%重組病毒%增彊性綠色熒光蛋白
저번식여호흡종합정병독%중조병독%증강성록색형광단백
porcine reproductive and respiratory syndrome virus%recombinant virus%enhanced green fluorescent protein
为鉴定猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)复制的非必需基因区,本研究在高致病性PRRSV细胞致弱株感染性克隆HuN4-F 112的基础上,在其基因组ORF1b和ORF2a之间插入增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因,并在外源基因3’端下游插入该病毒的转录调控序列6 (TRS6),构建PRRSV-EGFP感染性克隆.将其体外转录制备的病毒全长RNA转染Marc-145细胞后,拯救获得了表达EGFP的重组病毒(rHuN4-F 112-EGFP).将rHuN4-F 112-EGFP在Marc-145细胞中进行连续传代至20代,其外源gfp基因仍能够持续表达,表明该重组病毒具有良好的遗传稳定性.与亲本病毒HuN4-F 112相比,重组病毒在病毒滴度、空斑形态等方面差异不显著;病毒生长曲线的结果显示,重组病毒具有良好的增殖能力.本研究结果表明,在PRRSV的ORF1b和ORF2a基因区中插入外源基因并未影响该病毒体外复制,该非必需基因区的鉴定为进一步研究以PRRSV疫苗为活病毒载体多价重组疫苗的研发奠定基础.
為鑒定豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒(PRRSV)複製的非必需基因區,本研究在高緻病性PRRSV細胞緻弱株感染性剋隆HuN4-F 112的基礎上,在其基因組ORF1b和ORF2a之間插入增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)基因,併在外源基因3’耑下遊插入該病毒的轉錄調控序列6 (TRS6),構建PRRSV-EGFP感染性剋隆.將其體外轉錄製備的病毒全長RNA轉染Marc-145細胞後,拯救穫得瞭錶達EGFP的重組病毒(rHuN4-F 112-EGFP).將rHuN4-F 112-EGFP在Marc-145細胞中進行連續傳代至20代,其外源gfp基因仍能夠持續錶達,錶明該重組病毒具有良好的遺傳穩定性.與親本病毒HuN4-F 112相比,重組病毒在病毒滴度、空斑形態等方麵差異不顯著;病毒生長麯線的結果顯示,重組病毒具有良好的增殖能力.本研究結果錶明,在PRRSV的ORF1b和ORF2a基因區中插入外源基因併未影響該病毒體外複製,該非必需基因區的鑒定為進一步研究以PRRSV疫苗為活病毒載體多價重組疫苗的研髮奠定基礎.
위감정저번식여호흡종합정병독(PRRSV)복제적비필수기인구,본연구재고치병성PRRSV세포치약주감염성극륭HuN4-F 112적기출상,재기기인조ORF1b화ORF2a지간삽입증강형록색형광단백(EGFP)기인,병재외원기인3’단하유삽입해병독적전록조공서렬6 (TRS6),구건PRRSV-EGFP감염성극륭.장기체외전록제비적병독전장RNA전염Marc-145세포후,증구획득료표체EGFP적중조병독(rHuN4-F 112-EGFP).장rHuN4-F 112-EGFP재Marc-145세포중진행련속전대지20대,기외원gfp기인잉능구지속표체,표명해중조병독구유량호적유전은정성.여친본병독HuN4-F 112상비,중조병독재병독적도、공반형태등방면차이불현저;병독생장곡선적결과현시,중조병독구유량호적증식능력.본연구결과표명,재PRRSV적ORF1b화ORF2a기인구중삽입외원기인병미영향해병독체외복제,해비필수기인구적감정위진일보연구이PRRSV역묘위활병독재체다개중조역묘적연발전정기출.
