CAJ | 학술논문

为建立牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的TaqMan荧光定量PCR检测方法,本研究根据IBRV gB基因保守区域设计特异性引物和MGB探针,并采用矩阵法优化了PCR反应条件.结果显示,标准曲线相关系数(R2)为0.998,103拷贝/μL～108拷贝/μL内具有较好的线性关系.对牛呼吸道合胞体、牛病毒性腹泻粘膜病1型、牛副流感病毒3型的cDNA进行检测,结果均为阴性,特异性良好.该方法对IBRV检测的灵敏度可达到1.49×101拷贝/μL,是常规PCR灵敏度的100倍,重复性试验表明该方法的组内和组间变异系数均小于1.5％.应用建立的方法与普通PCR方法分别对17份疑似临床呼吸道症状牛鼻黏液拭子样品进行检测,该方法检测的阳性率比传统PCR法检测的阳性率提高了约12％.研究表明建立的IBRV TaqMan-MGB荧光定量PCR方法灵敏、快速、特异性强、重复性好,适用于临床疑似样品的快速定量检测.
위건립우전염성비기관염병독(IBRV)적TaqMan형광정량PCR검측방법,본연구근거IBRV gB기인보수구역설계특이성인물화MGB탐침,병채용구진법우화료PCR반응조건.결과현시,표준곡선상관계수(R2)위0.998,103고패/μL～108고패/μL내구유교호적선성관계.대우호흡도합포체、우병독성복사점막병1형、우부류감병독3형적cDNA진행검측,결과균위음성,특이성량호.해방법대IBRV검측적령민도가체도1.49×101고패/μL,시상규PCR령민도적100배,중복성시험표명해방법적조내화조간변이계수균소우1.5％.응용건립적방법여보통PCR방법분별대17빈의사림상호흡도증상우비점액식자양품진행검측,해방법검측적양성솔비전통PCR법검측적양성솔제고료약12％.연구표명건립적IBRV TaqMan-MGB형광정량PCR방법령민、쾌속、특이성강、중복성호,괄용우림상의사양품적쾌속정량검측.