CAJ | 학술논문

利用含PET-Urate Oxidase表达质粒的重组E.coli JM109 (DE3)菌株进行大规模发酵培养,拟建立一种高效、低成本的生产重组尿酸酶的技术工艺路线.取冻存的工程菌接种于含质量分数1％琼脂的种子培养基中进行培养,从划线平板上挑取单菌落接种于摇瓶中继续培养,最后以体积分数5％接种量接种于发酵培养基中,绘制生长曲线;以乳糖作为诱导剂与传统IPTG诱导方法进行发酵培养比较;菌体经高压均质机破碎、质量分数40％～60％硫酸铵分级沉淀,以及Q-Sepharose F.F.层析进行分离纯化.结果显示,乳糖作为诱导剂在300 L的发酵罐中进行培养可获得菌体湿质量2 700 g,目的蛋白质表达量占菌体可溶性蛋白质的30％左右,略高于IPTG诱导的效果;经分离纯化后该酶的纯化倍数可达原来的4.5倍,活性回收率为40％;纯化的重组尿酸酶经SDS-PAGE和HPLC分析,显示单一蛋白质色带和单一洗脱峰.成果为该酶的医学实际应用奠定了理论实验基础.
이용함PET-Urate Oxidase표체질립적중조E.coli JM109 (DE3)균주진행대규모발효배양,의건립일충고효、저성본적생산중조뇨산매적기술공예로선.취동존적공정균접충우함질량분수1％경지적충자배양기중진행배양,종화선평판상도취단균락접충우요병중계속배양,최후이체적분수5％접충량접충우발효배양기중,회제생장곡선;이유당작위유도제여전통IPTG유도방법진행발효배양비교;균체경고압균질궤파쇄、질량분수40％～60％류산안분급침정,이급Q-Sepharose F.F.층석진행분리순화.결과현시,유당작위유도제재300 L적발효관중진행배양가획득균체습질량2 700 g,목적단백질표체량점균체가용성단백질적30％좌우,략고우IPTG유도적효과;경분리순화후해매적순화배수가체원래적4.5배,활성회수솔위40％;순화적중조뇨산매경SDS-PAGE화HPLC분석,현시단일단백질색대화단일세탈봉.성과위해매적의학실제응용전정료이론실험기출.