中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2015年
4期
456-461
,共6页
维生素D%自噬%结核分枝杆菌%巨噬细胞
維生素D%自噬%結覈分枝桿菌%巨噬細胞
유생소D%자서%결핵분지간균%거서세포
Vitamin D%Autophagy%Mycobacterium tuberculosis%Macrophages
目的：探讨维生素D诱导巨噬细胞产生自噬并清除巨噬细胞内结核分枝杆菌（ Mtb）的作用。方法：使用豆蔻酰佛波醇乙酯（ PMA）诱导U937细胞分化使之具有吞噬能力，分化后的U937细胞随机分为阴性对照组、维生素D组、自噬抑制剂（3－MA）＋维生素D组、阳性对照（雷帕霉素）组，以Mtb感染U937细胞6 h。感染后第4天，利用半定量RT－PCR检测自噬相关基因ATG5、Beclin－1及LL－37、LC3B mRNA的表达，流式细胞术检测LC3B－Ⅱ＋和／或结核分枝杆菌抗原85A＋（ Ag85A＋）的细胞。结果：与对照组相比，维生素D组ATG5、Beclin－1、LL－37、LC3B mRNA的表达增强（P＜0．01），LC3B－Ⅱ＋－细胞增多， Ag85A＋－细胞减少，且LC3B－Ⅱ＋－Ag85A－－细胞增加（维生素D组38．0％比阴性对照组1．08％）。与维生素D组相比，在自噬抑制剂3－MA＋维生素D组中，不但ATG5、Beclin－1、LC3B的mRNA表达受到抑制，LL－37的mRNA表达较维生素D组减少，而且3－MA抑制了细胞LC3B－Ⅱ的表达，同时抑制了1，25（OH）2D3对LC3B－Ⅱ＋－Ag85A－－细胞增加的作用。结论：维生素D能够诱导巨噬细胞产生自噬作用，并进一步有助于巨噬细胞清除结核分枝杆菌。
目的：探討維生素D誘導巨噬細胞產生自噬併清除巨噬細胞內結覈分枝桿菌（ Mtb）的作用。方法：使用豆蔻酰彿波醇乙酯（ PMA）誘導U937細胞分化使之具有吞噬能力，分化後的U937細胞隨機分為陰性對照組、維生素D組、自噬抑製劑（3－MA）＋維生素D組、暘性對照（雷帕黴素）組，以Mtb感染U937細胞6 h。感染後第4天，利用半定量RT－PCR檢測自噬相關基因ATG5、Beclin－1及LL－37、LC3B mRNA的錶達，流式細胞術檢測LC3B－Ⅱ＋和／或結覈分枝桿菌抗原85A＋（ Ag85A＋）的細胞。結果：與對照組相比，維生素D組ATG5、Beclin－1、LL－37、LC3B mRNA的錶達增彊（P＜0．01），LC3B－Ⅱ＋－細胞增多， Ag85A＋－細胞減少，且LC3B－Ⅱ＋－Ag85A－－細胞增加（維生素D組38．0％比陰性對照組1．08％）。與維生素D組相比，在自噬抑製劑3－MA＋維生素D組中，不但ATG5、Beclin－1、LC3B的mRNA錶達受到抑製，LL－37的mRNA錶達較維生素D組減少，而且3－MA抑製瞭細胞LC3B－Ⅱ的錶達，同時抑製瞭1，25（OH）2D3對LC3B－Ⅱ＋－Ag85A－－細胞增加的作用。結論：維生素D能夠誘導巨噬細胞產生自噬作用，併進一步有助于巨噬細胞清除結覈分枝桿菌。
목적：탐토유생소D유도거서세포산생자서병청제거서세포내결핵분지간균（ Mtb）적작용。방법：사용두구선불파순을지（ PMA）유도U937세포분화사지구유탄서능력，분화후적U937세포수궤분위음성대조조、유생소D조、자서억제제（3－MA）＋유생소D조、양성대조（뢰파매소）조，이Mtb감염U937세포6 h。감염후제4천，이용반정량RT－PCR검측자서상관기인ATG5、Beclin－1급LL－37、LC3B mRNA적표체，류식세포술검측LC3B－Ⅱ＋화／혹결핵분지간균항원85A＋（ Ag85A＋）적세포。결과：여대조조상비，유생소D조ATG5、Beclin－1、LL－37、LC3B mRNA적표체증강（P＜0．01），LC3B－Ⅱ＋－세포증다， Ag85A＋－세포감소，차LC3B－Ⅱ＋－Ag85A－－세포증가（유생소D조38．0％비음성대조조1．08％）。여유생소D조상비，재자서억제제3－MA＋유생소D조중，불단ATG5、Beclin－1、LC3B적mRNA표체수도억제，LL－37적mRNA표체교유생소D조감소，이차3－MA억제료세포LC3B－Ⅱ적표체，동시억제료1，25（OH）2D3대LC3B－Ⅱ＋－Ag85A－－세포증가적작용。결론：유생소D능구유도거서세포산생자서작용，병진일보유조우거서세포청제결핵분지간균。
Objective:To investigate the role of vitamin D-induced autophagy in macrophages against Mycobacterium tuberculosis(Mtb).Methods:Induce U937 cells to differentiate into macrophages with phagocytic capacity by phorbol 12-myristate 13-acetate(PMA).The cells were randomly divided into negative control group,vitamin D group,autophagy inhibitor(3-MA)+vitamin D group,positive control(rapamycin)group.Infect all groups with Mtb for 6 hours.In the 4th day after infection,the mRNA expressions of autophagy-related genes ATG5, Beclin-1 and LL-37, LC3B were determined by semi-quantitative RT-PCR.LC3B-Ⅱ+and/or Mycobacterium tuberculosis antigen 85A+( Ag85A+)-cells were counted by flow cytometry.Results:Compared with the control groups, the mRNA expressions of ATG5,Beclin-1,LL-37 and LC3B were enhanced(P<0.01),the numbers of LC3B-Ⅱ+-cells increased,the numbers of Ag85A+-cells decreased, and the numbers of LC3B-Ⅱ+-Ag85A--cells increased ( vitamin D group 38.0% vs negative control group1.08%).Compared with the vitamin D group,the mRNA expressions of ATG5,Beclin-1 and LC3B were suppressed in the autophagy inhibitor(3-MA)+Vitamin D group,the mRNA expressions of LL-37 were reduced,and 3-MA inhibited the expression of LC3B-Ⅱ in cells with inhibition of LC3B-Ⅱ+-Ag85A--cells increase as well.Conclusion: Vitamin D can induce macrophage autophagy and further contribute to scavenging Mycobacterium tuberculosis.
