宁夏医科大学学报
寧夏醫科大學學報
저하의과대학학보
JOURNAL OF NINGXIA MEDICAL COLLEGE
2015年
2期
221-223,封4
,共4页
高小茹%张冬梅%郑月梅%温恒
高小茹%張鼕梅%鄭月梅%溫恆
고소여%장동매%정월매%온항
心室肌细胞%原代培养%新生SD大鼠
心室肌細胞%原代培養%新生SD大鼠
심실기세포%원대배양%신생SD대서
@@
目的 探讨简单稳定、可靠的新生SD大鼠心室肌细胞原代培养方法,使分离的心室肌细胞存活率和纯度更高.方法 用胰蛋白酶和胶原酶Ⅱ型联合消化,分离新生大鼠心室肌细胞,离心使用低转速(750r·6min-1),进行体外培养,观察使用培养板贴壁细胞的原位计数方法计算存活率,观察心室肌细胞生存过程当中的形态以及心率变化,并以细胞免疫荧光进行心室肌细胞纯度鉴定,结合共聚焦镜下观察心室肌细胞形态结构.结果 最初分离下来的心室肌细胞为圆形,形状饱满,亮度高,培养第1天,心肌细胞多数贴壁,伸出伪足,少数贴壁的单个细胞开始出现搏动,搏动的频率和节律不齐,培养3 ～4d后可铺满成单层,呈大片同心圆状,开始同步搏动,收缩有力,搏动频率多在40～90次·min-1.培养第5～7天的心室肌细胞搏动频率趋于一致,搏动频率多在80 ～ 100次·min-1.直至第9d后细胞的搏动频率逐渐下降,成纤维细胞逐渐优势生长,搏动细胞的比例也逐渐降低,心室肌细胞形态开始明显改变,培养第20天时,部分细胞停止搏动,形态发生很大的改变,心室肌细胞的胞浆出现空泡,原先出现的伪足的地方变细,开始出现断续的表现,细胞大多脱落;免疫荧光显示培养的心室肌细胞纯度达93％以上;平均存活率达96％.结论 改进的细胞培养技术可获得生长状态良好的心室肌细胞,提高存活率和心室肌细胞纯度.
目的 探討簡單穩定、可靠的新生SD大鼠心室肌細胞原代培養方法,使分離的心室肌細胞存活率和純度更高.方法 用胰蛋白酶和膠原酶Ⅱ型聯閤消化,分離新生大鼠心室肌細胞,離心使用低轉速(750r·6min-1),進行體外培養,觀察使用培養闆貼壁細胞的原位計數方法計算存活率,觀察心室肌細胞生存過程噹中的形態以及心率變化,併以細胞免疫熒光進行心室肌細胞純度鑒定,結閤共聚焦鏡下觀察心室肌細胞形態結構.結果 最初分離下來的心室肌細胞為圓形,形狀飽滿,亮度高,培養第1天,心肌細胞多數貼壁,伸齣偽足,少數貼壁的單箇細胞開始齣現搏動,搏動的頻率和節律不齊,培養3 ～4d後可鋪滿成單層,呈大片同心圓狀,開始同步搏動,收縮有力,搏動頻率多在40～90次·min-1.培養第5～7天的心室肌細胞搏動頻率趨于一緻,搏動頻率多在80 ～ 100次·min-1.直至第9d後細胞的搏動頻率逐漸下降,成纖維細胞逐漸優勢生長,搏動細胞的比例也逐漸降低,心室肌細胞形態開始明顯改變,培養第20天時,部分細胞停止搏動,形態髮生很大的改變,心室肌細胞的胞漿齣現空泡,原先齣現的偽足的地方變細,開始齣現斷續的錶現,細胞大多脫落;免疫熒光顯示培養的心室肌細胞純度達93％以上;平均存活率達96％.結論 改進的細胞培養技術可穫得生長狀態良好的心室肌細胞,提高存活率和心室肌細胞純度.
목적 탐토간단은정、가고적신생SD대서심실기세포원대배양방법,사분리적심실기세포존활솔화순도경고.방법 용이단백매화효원매Ⅱ형연합소화,분리신생대서심실기세포,리심사용저전속(750r·6min-1),진행체외배양,관찰사용배양판첩벽세포적원위계수방법계산존활솔,관찰심실기세포생존과정당중적형태이급심솔변화,병이세포면역형광진행심실기세포순도감정,결합공취초경하관찰심실기세포형태결구.결과 최초분리하래적심실기세포위원형,형상포만,량도고,배양제1천,심기세포다수첩벽,신출위족,소수첩벽적단개세포개시출현박동,박동적빈솔화절률불제,배양3 ～4d후가포만성단층,정대편동심원상,개시동보박동,수축유력,박동빈솔다재40～90차·min-1.배양제5～7천적심실기세포박동빈솔추우일치,박동빈솔다재80 ～ 100차·min-1.직지제9d후세포적박동빈솔축점하강,성섬유세포축점우세생장,박동세포적비례야축점강저,심실기세포형태개시명현개변,배양제20천시,부분세포정지박동,형태발생흔대적개변,심실기세포적포장출현공포,원선출현적위족적지방변세,개시출현단속적표현,세포대다탈락;면역형광현시배양적심실기세포순도체93％이상;평균존활솔체96％.결론 개진적세포배양기술가획득생장상태량호적심실기세포,제고존활솔화심실기세포순도.
