宁夏医科大学学报
寧夏醫科大學學報
저하의과대학학보
JOURNAL OF NINGXIA MEDICAL COLLEGE
2015年
2期
120-124,封4
,共6页
李红兵%杨文%陈健茂%刘强%王志辉%张昕%吴璟%郎多勇%王志昇
李紅兵%楊文%陳健茂%劉彊%王誌輝%張昕%吳璟%郎多勇%王誌昇
리홍병%양문%진건무%류강%왕지휘%장흔%오경%랑다용%왕지승
细粒棘球蚴%Eg95-Eg.ferritin融合基因%杆状病毒%Sf-9细胞%表达
細粒棘毬蚴%Eg95-Eg.ferritin融閤基因%桿狀病毒%Sf-9細胞%錶達
세립극구유%Eg95-Eg.ferritin융합기인%간상병독%Sf-9세포%표체
Echinococcus granulosus%Eg95-Eg.ferritin fusion gene%baculovirus%Sf-9 cells%expression
目的 利用昆虫细胞/杆状病毒系统表达细粒棘球蚴Eg95-Eg.ferritin融合蛋白,用于开发包虫病薪型疫苗以及建立相关血清学诊断方法等研究.方法 从细粒棘球蚴包囊中分离原头节,超声粉碎后提取总RNA为模板,通过RT-PCR扩增细粒棘球蚴Eg95和Eg.ferritin基因,采用基因拼接法将Eg95和Eg.ferritin 融合,将该融合基因Eg95-Eg.ferritin插入到pFast Bac DUAL载体中,构建重组转座载体后转化DH10Bac感受态细胞,获得重组Bacmid质粒后转染Sf-9昆虫细胞,传毒3代,对表达蛋白进行Western blot鉴定.结果 成功克隆了Eg95和Eg.ferritin基因,通过柔性氨基酸linker成功获得了融合基因Eg95-Eg.ferritin,经PCR和酶切鉴定成功构建了重组质粒pFastBac DUAL-Eg95-Eg.ferritin,Western blot结果证实表达蛋白能够被包虫病人标准阳性血清识别.结论 在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中成功表达了细粒棘球蚴Eg95-Eg.ferritin融合蛋白,与包虫病人标准阳性血清具有良好的反应性.
目的 利用昆蟲細胞/桿狀病毒繫統錶達細粒棘毬蚴Eg95-Eg.ferritin融閤蛋白,用于開髮包蟲病薪型疫苗以及建立相關血清學診斷方法等研究.方法 從細粒棘毬蚴包囊中分離原頭節,超聲粉碎後提取總RNA為模闆,通過RT-PCR擴增細粒棘毬蚴Eg95和Eg.ferritin基因,採用基因拼接法將Eg95和Eg.ferritin 融閤,將該融閤基因Eg95-Eg.ferritin插入到pFast Bac DUAL載體中,構建重組轉座載體後轉化DH10Bac感受態細胞,穫得重組Bacmid質粒後轉染Sf-9昆蟲細胞,傳毒3代,對錶達蛋白進行Western blot鑒定.結果 成功剋隆瞭Eg95和Eg.ferritin基因,通過柔性氨基痠linker成功穫得瞭融閤基因Eg95-Eg.ferritin,經PCR和酶切鑒定成功構建瞭重組質粒pFastBac DUAL-Eg95-Eg.ferritin,Western blot結果證實錶達蛋白能夠被包蟲病人標準暘性血清識彆.結論 在Bac-to-Bac桿狀病毒錶達繫統中成功錶達瞭細粒棘毬蚴Eg95-Eg.ferritin融閤蛋白,與包蟲病人標準暘性血清具有良好的反應性.
목적 이용곤충세포/간상병독계통표체세립극구유Eg95-Eg.ferritin융합단백,용우개발포충병신형역묘이급건립상관혈청학진단방법등연구.방법 종세립극구유포낭중분리원두절,초성분쇄후제취총RNA위모판,통과RT-PCR확증세립극구유Eg95화Eg.ferritin기인,채용기인병접법장Eg95화Eg.ferritin 융합,장해융합기인Eg95-Eg.ferritin삽입도pFast Bac DUAL재체중,구건중조전좌재체후전화DH10Bac감수태세포,획득중조Bacmid질립후전염Sf-9곤충세포,전독3대,대표체단백진행Western blot감정.결과 성공극륭료Eg95화Eg.ferritin기인,통과유성안기산linker성공획득료융합기인Eg95-Eg.ferritin,경PCR화매절감정성공구건료중조질립pFastBac DUAL-Eg95-Eg.ferritin,Western blot결과증실표체단백능구피포충병인표준양성혈청식별.결론 재Bac-to-Bac간상병독표체계통중성공표체료세립극구유Eg95-Eg.ferritin융합단백,여포충병인표준양성혈청구유량호적반응성.
