江西师范大学学报（自然科学版）
江西師範大學學報（自然科學版）
강서사범대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF JIANGXI NORMAL UNIVERSITY（NATURAL SCIENCES EDITION）
2015年
1期
101-105
,共5页
幸鹏%刘玉琳%喻海琼%李盟%刘志刚%刘晓宇
倖鵬%劉玉琳%喻海瓊%李盟%劉誌剛%劉曉宇
행붕%류옥림%유해경%리맹%류지강%류효우
粉尘螨%过敏原%重组脂肪酶%生物信息学分析
粉塵螨%過敏原%重組脂肪酶%生物信息學分析
분진만%과민원%중조지방매%생물신식학분석
dust mites%allergen%recombination lipase%bioinformatics analysis
为克隆原核表达并纯化出粉尘螨过敏原脂肪酶蛋白,鉴定其免疫学活性,并分析其分子特征.通过重组合成粉尘螨新过敏原脂肪酶基因,与pET-28a载体连接后转化大肠埃希菌E.coli Topl0,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组新过敏原脂肪酶蛋白;经镍柱亲和层析纯化出粉尘螨重组脂肪酶蛋白,用Western Blot、ELISA方法检测其免疫原性.用生物信息学软件预测其理化性质、二级结构,并构建分子进化树.成功表达纯化出高纯度的粉尘螨重组脂肪酶蛋白,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示表达重组产物分子质量约为40 kDa,与理论值一致,纯化后的表达产物经Westernblot印迹检测有明显条带显示.信息学分析显示蛋白二级结构由α螺旋(16.38％)、延伸主链(18.93％)、无规则卷曲(64.69％)组成.成功原核表达出粉尘螨过敏原脂肪酶蛋白,并纯化获得较高纯度及较强免疫学活性的重组脂肪酶蛋白,为尘螨过敏性疾病的特异性诊断和免疫治疗奠定理论基础.
為剋隆原覈錶達併純化齣粉塵螨過敏原脂肪酶蛋白,鑒定其免疫學活性,併分析其分子特徵.通過重組閤成粉塵螨新過敏原脂肪酶基因,與pET-28a載體連接後轉化大腸埃希菌E.coli Topl0,用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導錶達重組新過敏原脂肪酶蛋白;經鎳柱親和層析純化齣粉塵螨重組脂肪酶蛋白,用Western Blot、ELISA方法檢測其免疫原性.用生物信息學軟件預測其理化性質、二級結構,併構建分子進化樹.成功錶達純化齣高純度的粉塵螨重組脂肪酶蛋白,十二烷基硫痠鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)結果顯示錶達重組產物分子質量約為40 kDa,與理論值一緻,純化後的錶達產物經Westernblot印跡檢測有明顯條帶顯示.信息學分析顯示蛋白二級結構由α螺鏇(16.38％)、延伸主鏈(18.93％)、無規則捲麯(64.69％)組成.成功原覈錶達齣粉塵螨過敏原脂肪酶蛋白,併純化穫得較高純度及較彊免疫學活性的重組脂肪酶蛋白,為塵螨過敏性疾病的特異性診斷和免疫治療奠定理論基礎.
위극륭원핵표체병순화출분진만과민원지방매단백,감정기면역학활성,병분석기분자특정.통과중조합성분진만신과민원지방매기인,여pET-28a재체련접후전화대장애희균E.coli Topl0,용이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도표체중조신과민원지방매단백;경얼주친화층석순화출분진만중조지방매단백,용Western Blot、ELISA방법검측기면역원성.용생물신식학연건예측기이화성질、이급결구,병구건분자진화수.성공표체순화출고순도적분진만중조지방매단백,십이완기류산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)결과현시표체중조산물분자질량약위40 kDa,여이론치일치,순화후적표체산물경Westernblot인적검측유명현조대현시.신식학분석현시단백이급결구유α라선(16.38％)、연신주련(18.93％)、무규칙권곡(64.69％)조성.성공원핵표체출분진만과민원지방매단백,병순화획득교고순도급교강면역학활성적중조지방매단백,위진만과민성질병적특이성진단화면역치료전정이론기출.
