CAJ | 학술논문

目的研究脑苷肌肽对缺血性卒中患者发挥神经保护作用的可能机制，探讨星形胶质细胞在脑保护中的作用。 　　方法取10只孕16～18dSD大鼠的胚胎、及10只24h SD乳鼠的脑组织分别用于原代神经元及原代星形胶质细胞培养，经免疫组化染色证实培养的细胞分别为神经元和星形胶质细胞后，给予1 mmol/L、5 mmol/L、10 mmol/L、20 mmol/L和40 mmol/L 2，2-偶氮二（2-甲基丙基咪）二盐酸盐｛2，2’-Azobis [（2-methylpropionamidine）dihydrochloride，AAPH]｝模拟缺血性卒中诱导神经元和星形胶质细胞损伤，并通过利用分光光度计分析细胞活力，观察AAPH对细胞活力的影响；观察0.025μg/ml、0.05μg/ml和0.1μg/ml脑苷肌肽对星形胶质细胞的保护作用，同时制备脑苷肌肽－星形胶质细胞条件培养基，比较条件培养基对AAPH诱导的神经元损伤的保护作用。 　　结果经分光光度计分析40 mmol/L AAPH为合适诱导损伤浓度，在AAPH损伤4 h后，分别给予不同浓度的脑苷肌肽共同孵育24 h。结果显示0.025μg/ml、0.05μg/ml和0.1μg/ml浓度的脑苷肌肽均能够减轻AAPH造成的星形胶质细胞损伤，但0.05μg/ml和0.1μg/ml的脑苷肌肽的保护作最为显著。0.1μg/ml脑苷肌肽－星形胶质细胞条件培养基能够通过促进胶质细胞分泌胶质源性神经生长因子，进而保护AAPH诱导的神经元损伤（P＜0.05）。而将0.1μg/ml的脑苷肌肽作用24 h后的细胞上清液作为条件培养基，在40 mmol/L AAPH诱导神经元损伤后加入脑苷肌肽-星形胶质细胞条件培养基作用24 h。检测神经元细胞活力，发现脑苷肌肽-星形胶质细胞条件培养基能够逆转AAPH造成的神经元损伤，差异具有显著性（P＜0.05）。 　　结论脑苷肌肽作为临床常用的神经保护剂，其可能的作用机制之一是促进星形胶质细胞分泌胶质源性神经生长因子，发挥神经保护作用。目的研究腦苷肌肽對缺血性卒中患者髮揮神經保護作用的可能機製，探討星形膠質細胞在腦保護中的作用。 　　方法取10隻孕16～18dSD大鼠的胚胎、及10隻24h SD乳鼠的腦組織分彆用于原代神經元及原代星形膠質細胞培養，經免疫組化染色證實培養的細胞分彆為神經元和星形膠質細胞後，給予1 mmol/L、5 mmol/L、10 mmol/L、20 mmol/L和40 mmol/L 2，2-偶氮二（2-甲基丙基咪）二鹽痠鹽｛2，2’-Azobis [（2-methylpropionamidine）dihydrochloride，AAPH]｝模擬缺血性卒中誘導神經元和星形膠質細胞損傷，併通過利用分光光度計分析細胞活力，觀察AAPH對細胞活力的影響；觀察0.025μg/ml、0.05μg/ml和0.1μg/ml腦苷肌肽對星形膠質細胞的保護作用，同時製備腦苷肌肽－星形膠質細胞條件培養基，比較條件培養基對AAPH誘導的神經元損傷的保護作用。 　　結果經分光光度計分析40 mmol/L AAPH為閤適誘導損傷濃度，在AAPH損傷4 h後，分彆給予不同濃度的腦苷肌肽共同孵育24 h。結果顯示0.025μg/ml、0.05μg/ml和0.1μg/ml濃度的腦苷肌肽均能夠減輕AAPH造成的星形膠質細胞損傷，但0.05μg/ml和0.1μg/ml的腦苷肌肽的保護作最為顯著。0.1μg/ml腦苷肌肽－星形膠質細胞條件培養基能夠通過促進膠質細胞分泌膠質源性神經生長因子，進而保護AAPH誘導的神經元損傷（P＜0.05）。而將0.1μg/ml的腦苷肌肽作用24 h後的細胞上清液作為條件培養基，在40 mmol/L AAPH誘導神經元損傷後加入腦苷肌肽-星形膠質細胞條件培養基作用24 h。檢測神經元細胞活力，髮現腦苷肌肽-星形膠質細胞條件培養基能夠逆轉AAPH造成的神經元損傷，差異具有顯著性（P＜0.05）。 　　結論腦苷肌肽作為臨床常用的神經保護劑，其可能的作用機製之一是促進星形膠質細胞分泌膠質源性神經生長因子，髮揮神經保護作用。
목적연구뇌감기태대결혈성졸중환자발휘신경보호작용적가능궤제，탐토성형효질세포재뇌보호중적작용。 　　방법취10지잉16～18dSD대서적배태、급10지24h SD유서적뇌조직분별용우원대신경원급원대성형효질세포배양，경면역조화염색증실배양적세포분별위신경원화성형효질세포후，급여1 mmol/L、5 mmol/L、10 mmol/L、20 mmol/L화40 mmol/L 2，2-우담이（2-갑기병기미）이염산염｛2，2’-Azobis [（2-methylpropionamidine）dihydrochloride，AAPH]｝모의결혈성졸중유도신경원화성형효질세포손상，병통과이용분광광도계분석세포활력，관찰AAPH대세포활력적영향；관찰0.025μg/ml、0.05μg/ml화0.1μg/ml뇌감기태대성형효질세포적보호작용，동시제비뇌감기태－성형효질세포조건배양기，비교조건배양기대AAPH유도적신경원손상적보호작용。 　　결과경분광광도계분석40 mmol/L AAPH위합괄유도손상농도，재AAPH손상4 h후，분별급여불동농도적뇌감기태공동부육24 h。결과현시0.025μg/ml、0.05μg/ml화0.1μg/ml농도적뇌감기태균능구감경AAPH조성적성형효질세포손상，단0.05μg/ml화0.1μg/ml적뇌감기태적보호작최위현저。0.1μg/ml뇌감기태－성형효질세포조건배양기능구통과촉진효질세포분비효질원성신경생장인자，진이보호AAPH유도적신경원손상（P＜0.05）。이장0.1μg/ml적뇌감기태작용24 h후적세포상청액작위조건배양기，재40 mmol/L AAPH유도신경원손상후가입뇌감기태-성형효질세포조건배양기작용24 h。검측신경원세포활력，발현뇌감기태-성형효질세포조건배양기능구역전AAPH조성적신경원손상，차이구유현저성（P＜0.05）。 　　결론뇌감기태작위림상상용적신경보호제，기가능적작용궤제지일시촉진성형효질세포분비효질원성신경생장인자，발휘신경보호작용。
Objective To study the possible mechanism of cattle encephalon glycoside and ignotin (CEGI) to protect the neuron from damage. At the same time, the neuroprotective function of the astrocytes in brain injury was detected. Methods Ten pregnant Sprague Dawley (SD) rats and 10 neonatal SD rats were used to culture primarily neurons and astrocytes in the present study. To mimic the ischemic stroke, we added 40 mmol/L 2, 2'-Azobis (2-methylpropionamidine)dihydrochloride (AAPH) into the culture system to induce the cell injury. And the cell viabilities were detected with spectrophotometer. The protective functions of 0.025 μg/ml, 0.05 μg/ml and 0.1 μg/ml of CEGI were tested in the astrocyte culture system. At the same time, 0.1 μg/ml of CEGI-astrocyte conditional media were made to protect the neurons from AAPH induced injury. And the protective mechanism of CEGI was also detected. Results 40 mmol/L AAPH can be used to induce astrocyte injury. CEGI can ameliorate the AAPH induced astrocyte injury. 0.1 μg/ml of CEGI-astrocyte conditional media can increase the cell viability of neurons, and also CEGI-astrocyte conditional media can inhibit the apoptosis of neurons induced by AAPH. Western blot experiments demonstrated that CEGI-astrocyte conditional media could increase the level of glial cell-derived neurotrophic factor (GDNF) released from astrocytes to protect against neuronal damage induced by AAPH. Conclusion CEGI protects the neuron from injury by stimulating astrocyte secreting GDNF. And astrocytes are the target for neuroprotective drug screening.