中国卒中杂志
中國卒中雜誌
중국졸중잡지
CHINESE JOURNAL OF STROKE
2015年
4期
284-290
,共7页
郑翾%梁燕玲%陈佳%陈智毅%李斯颖%罗建华%方小波
鄭翾%樑燕玲%陳佳%陳智毅%李斯穎%囉建華%方小波
정현%량연령%진가%진지의%리사영%라건화%방소파
超声%微泡%To l样受体4%基因%核糖核苷酸干扰
超聲%微泡%To l樣受體4%基因%覈糖覈苷痠榦擾
초성%미포%To l양수체4%기인%핵당핵감산간우
Ultrasound%Microbubble%Toll-like receptor 4%Gene%RNA interference
目的 Tol样受体（Tol-like receptor，TLR）4表达水平与脑缺血合并高血糖后的痫性发作及脑梗死预后相关，本文探讨超声靶向微泡破裂（ultrasound-targeted microbubble destruction，UTMD）联合短发夹核糖核酸（short hairpin ribonucleic acid，shRNA）干扰技术沉默TLR4的可行性和应用价值。
<br> 方法将32只实验用Wistar大鼠分为4组：空白对照组（NS）、裸质粒组（P）、质粒联合超声辐照组（P+UTMD）、质粒与SonoVue联合超声辐照组（P+S+UTMD），每组各8只。裸质粒组注入质粒，质粒联合超声辐照组注入质粒行超声辐照，质粒与SonoVue联合超声辐照组侧脑室注入质粒和SonoVue微泡并行超声辐照，处理4 d后每组取5只大鼠行Western Blot检测大脑TLR4蛋白表达，取3只大鼠行免疫组织化学染色。
<br> 结果质粒联合超声辐照组和质粒与SonoVue联合超声辐照组抑制效果明显（P+S+UTMD：0.223±0.009，P+UTMD：0.277±0.013，t1，3=4.900，P＜0.01；t1，4=8.779，P＜0.01），裸质粒组与空白对照组差异无显著性（NS：0.351±0.030，P：0.339±0.034，t1，2=0.590，P＞0.05），而质粒与SonoVue联合超声辐照组与质粒联合超声辐照组相比抑制效果更好（P+S+UTMD：0.223±0.009，P+UTMD：0.277±0.013，t3，4=7.006，P＜0.05）。免疫组织化学的平均光度值分析显示，质粒联合超声辐照组和质粒与SonoVue联合超声辐照组抑制效果明显（P+S+UTMD：0.026±0.0013，P+UTMD：0.058±0.0014， t1，3=8.334，P＜0.01；t1，4=21.027，P＜0.01），裸质粒组与空白对照组差异无显著性（NS：0.079±0.0048， P：0.077±0.0012，t1，2=0.797，P＞0.05），而质粒与SonoVue联合超声辐照组与质粒联合超声辐照组相比抑制效果更好（P+S+UTMD：0.026±0.0013，P+UTMD：0.058±0.0014，t3，4=33.254，P＜0.05）。
<br> 结论超声微泡造影剂联合shRNA质粒可高效稳定沉默TLR4基因。
目的 Tol樣受體（Tol-like receptor，TLR）4錶達水平與腦缺血閤併高血糖後的癇性髮作及腦梗死預後相關，本文探討超聲靶嚮微泡破裂（ultrasound-targeted microbubble destruction，UTMD）聯閤短髮夾覈糖覈痠（short hairpin ribonucleic acid，shRNA）榦擾技術沉默TLR4的可行性和應用價值。
<br> 方法將32隻實驗用Wistar大鼠分為4組：空白對照組（NS）、裸質粒組（P）、質粒聯閤超聲輻照組（P+UTMD）、質粒與SonoVue聯閤超聲輻照組（P+S+UTMD），每組各8隻。裸質粒組註入質粒，質粒聯閤超聲輻照組註入質粒行超聲輻照，質粒與SonoVue聯閤超聲輻照組側腦室註入質粒和SonoVue微泡併行超聲輻照，處理4 d後每組取5隻大鼠行Western Blot檢測大腦TLR4蛋白錶達，取3隻大鼠行免疫組織化學染色。
<br> 結果質粒聯閤超聲輻照組和質粒與SonoVue聯閤超聲輻照組抑製效果明顯（P+S+UTMD：0.223±0.009，P+UTMD：0.277±0.013，t1，3=4.900，P＜0.01；t1，4=8.779，P＜0.01），裸質粒組與空白對照組差異無顯著性（NS：0.351±0.030，P：0.339±0.034，t1，2=0.590，P＞0.05），而質粒與SonoVue聯閤超聲輻照組與質粒聯閤超聲輻照組相比抑製效果更好（P+S+UTMD：0.223±0.009，P+UTMD：0.277±0.013，t3，4=7.006，P＜0.05）。免疫組織化學的平均光度值分析顯示，質粒聯閤超聲輻照組和質粒與SonoVue聯閤超聲輻照組抑製效果明顯（P+S+UTMD：0.026±0.0013，P+UTMD：0.058±0.0014， t1，3=8.334，P＜0.01；t1，4=21.027，P＜0.01），裸質粒組與空白對照組差異無顯著性（NS：0.079±0.0048， P：0.077±0.0012，t1，2=0.797，P＞0.05），而質粒與SonoVue聯閤超聲輻照組與質粒聯閤超聲輻照組相比抑製效果更好（P+S+UTMD：0.026±0.0013，P+UTMD：0.058±0.0014，t3，4=33.254，P＜0.05）。
<br> 結論超聲微泡造影劑聯閤shRNA質粒可高效穩定沉默TLR4基因。
목적 Tol양수체（Tol-like receptor，TLR）4표체수평여뇌결혈합병고혈당후적간성발작급뇌경사예후상관，본문탐토초성파향미포파렬（ultrasound-targeted microbubble destruction，UTMD）연합단발협핵당핵산（short hairpin ribonucleic acid，shRNA）간우기술침묵TLR4적가행성화응용개치。
<br> 방법장32지실험용Wistar대서분위4조：공백대조조（NS）、라질립조（P）、질립연합초성복조조（P+UTMD）、질립여SonoVue연합초성복조조（P+S+UTMD），매조각8지。라질립조주입질립，질립연합초성복조조주입질립행초성복조，질립여SonoVue연합초성복조조측뇌실주입질립화SonoVue미포병행초성복조，처리4 d후매조취5지대서행Western Blot검측대뇌TLR4단백표체，취3지대서행면역조직화학염색。
<br> 결과질립연합초성복조조화질립여SonoVue연합초성복조조억제효과명현（P+S+UTMD：0.223±0.009，P+UTMD：0.277±0.013，t1，3=4.900，P＜0.01；t1，4=8.779，P＜0.01），라질립조여공백대조조차이무현저성（NS：0.351±0.030，P：0.339±0.034，t1，2=0.590，P＞0.05），이질립여SonoVue연합초성복조조여질립연합초성복조조상비억제효과경호（P+S+UTMD：0.223±0.009，P+UTMD：0.277±0.013，t3，4=7.006，P＜0.05）。면역조직화학적평균광도치분석현시，질립연합초성복조조화질립여SonoVue연합초성복조조억제효과명현（P+S+UTMD：0.026±0.0013，P+UTMD：0.058±0.0014， t1，3=8.334，P＜0.01；t1，4=21.027，P＜0.01），라질립조여공백대조조차이무현저성（NS：0.079±0.0048， P：0.077±0.0012，t1，2=0.797，P＞0.05），이질립여SonoVue연합초성복조조여질립연합초성복조조상비억제효과경호（P+S+UTMD：0.026±0.0013，P+UTMD：0.058±0.0014，t3，4=33.254，P＜0.05）。
<br> 결론초성미포조영제연합shRNA질립가고효은정침묵TLR4기인。
Objective To determine the effect of the association of ultrasound and microbubble with short hairpin RNA ( shRNA) silencing Wistar rat brain Toll-like receptor 4 (TLR4).
<br> Methods Wistar rats were divided into 4 groups:normal sodium (NS) group, naked plasmid group (P), plasmid plus ultrasound (US) irradiation group (P+ultrasound-targeted microbubble destruction [UTMD]), plasmid plus US irradiation and SonoVue group (P+S+UTMD). Lateral ventricle injection of plasmid and SonoVue microbubble into rats' brain was performed and the brains were exposed to extracranial US, the brain TLR4 gene expression efifciency was evaluated 4 days after treatment.
<br> Results Western blot result shows that there is not statistical difference between NS group and naked plasmid group (NS:0.351±0.030, P:0.339±0.034, t1, 2=0.590;P>0.05), but plasmid plus US irradiation group (P+UTMD) and plasmid plus US irradiation and SonoVue group (P+S+UTMD) shows statistical differences between NS group and naked plasmid group (P+S+UTMD:0.223±0.009, P+UTMD:0.277±0.013, t1, 3=4.900, P<0.01;t1, 4=8.779, P<0.01).Immunohistochemical analysis also shows statistical differences between Ultrasound Group (P+UTMD group and P+S+UTMD group) and non-Ultrasound group (NS and P) (P+S+UTMD:0.026±0.0013, P+UTMD:0.058±0.0014, t1, 3=8.334, P<0.01;t1, 4=21.027, P<0.01). There is not statistical difference between NS group and naked plasmid group (NS:0.079±0.0048, P:0.077±0.0012, t1, 2=0.797;P>0.05) and P+S+UTMD group has better inhibition effects compared with P+UTMD group (P+S+UTMD:0.026±0.0013, P+UTMD:0.058±0.0014, t3, 4=33.254;P<0.05).
<br> Conclusion The present study shows that this method of UTMD combined mediated shRNA can be used to deliver plasmid deoxyribonucleic acid (DNA) to the brain selectively and effectively. This noninvasive technique is a promising method for cerebral therapy and could be applied in the rapidly developing gene therapy for cerebral diseases.
