中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2015年
3期
163-166
,共4页
牛军伟%郭龙军%谷伟红%黄明明%李忍%骆晓蕾%王玉娥
牛軍偉%郭龍軍%穀偉紅%黃明明%李忍%駱曉蕾%王玉娥
우군위%곽룡군%곡위홍%황명명%리인%락효뢰%왕옥아
猪繁殖与呼吸综合症病毒%CD163%稳定表达%HEK293细胞系
豬繁殖與呼吸綜閤癥病毒%CD163%穩定錶達%HEK293細胞繫
저번식여호흡종합증병독%CD163%은정표체%HEK293세포계
PRRSV%CD163%consistent expression%HEK293 cell line
为构建稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)受体CD163的HEK293细胞系,本研究采用RT-PCR方法从猪肺泡巨噬细胞(PAM)总RNA中扩增CD163基因并将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组质粒pcDNA-CD163.将该重组质粒转染HEK293细胞,并利用G418筛选、纯化,获得了稳定表达CD163受体蛋白的HEK293CD163细胞系.RT-PCR、流式细胞术及western blot检测结果表明,该细胞系在传代至15代后,CD163在HEK293细胞中仍然能够稳定表达.在该细胞系中接种PRRSV后进行间接免疫荧光及噬斑试验检测表明,病毒能够通过CD163感染HEK293CD 163细胞并在其中增殖.该细胞系的建立为进一步研究PRRSV的侵入细胞和致病机制提供了病毒在体外增殖的易感细胞系.
為構建穩定錶達豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒(PRRSV)受體CD163的HEK293細胞繫,本研究採用RT-PCR方法從豬肺泡巨噬細胞(PAM)總RNA中擴增CD163基因併將其剋隆至真覈錶達載體pcDNA3.1(+)中,構建重組質粒pcDNA-CD163.將該重組質粒轉染HEK293細胞,併利用G418篩選、純化,穫得瞭穩定錶達CD163受體蛋白的HEK293CD163細胞繫.RT-PCR、流式細胞術及western blot檢測結果錶明,該細胞繫在傳代至15代後,CD163在HEK293細胞中仍然能夠穩定錶達.在該細胞繫中接種PRRSV後進行間接免疫熒光及噬斑試驗檢測錶明,病毒能夠通過CD163感染HEK293CD 163細胞併在其中增殖.該細胞繫的建立為進一步研究PRRSV的侵入細胞和緻病機製提供瞭病毒在體外增殖的易感細胞繫.
위구건은정표체저번식여호흡종합정병독(PRRSV)수체CD163적HEK293세포계,본연구채용RT-PCR방법종저폐포거서세포(PAM)총RNA중확증CD163기인병장기극륭지진핵표체재체pcDNA3.1(+)중,구건중조질립pcDNA-CD163.장해중조질립전염HEK293세포,병이용G418사선、순화,획득료은정표체CD163수체단백적HEK293CD163세포계.RT-PCR、류식세포술급western blot검측결과표명,해세포계재전대지15대후,CD163재HEK293세포중잉연능구은정표체.재해세포계중접충PRRSV후진행간접면역형광급서반시험검측표명,병독능구통과CD163감염HEK293CD 163세포병재기중증식.해세포계적건립위진일보연구PRRSV적침입세포화치병궤제제공료병독재체외증식적역감세포계.
