CAJ | 학술논문

目的:本研究旨在分析AML1-ETO阳性白血病中SIRT1基因的表达及调控机理,寻找SIRT1核心启动子区域.方法:利用实时定量PCR方法在AML1-ETO阳性白血病细胞株和白血病临床样本中研究SIRT1基因的表达情况;构建SIRT1基因启动子-荧光素酶报告载体,分析其在293T细胞中的活性.采用PCR方法从含有SIRT1基因转录起始位点5'区的基因片段中扩增SIRT1基因核心启动子序列,插入经Xho Ⅰ和HindⅢ双酶切的荧光素酶报告载体pGL3-Basic,采用阳离子脂质体SuperFect包裹荧光素酶报告重组子转染293T细胞,应用双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性.采用双荧光素酶报告基因检测方法,研究AML1-ETO对SIRT1启动子转录活性的调节作用.结果:AML1-ETO的表达与SIRT1的表达呈正相关;成功构建了6种SIRT1基因序列的荧光素酶报告重组子,并通过了酶切以及基因测序方法的鉴定;荧光素酶报告重组子在293T细胞中的荧光素酶活性明显高于阴性对照,明确了SIRT1基因核心启动子位置;研究结果证明融合蛋白AML1-ETO可以正向调控SIRT1启动子活性,SIRT1对AML1-ETO阳性白血病发生发展的影响.研究表明:SIRT1可能是AML1-ETO的靶基因之一.结论:成功构建了SIRT1基因启动子-荧光素酶报告载体,找到了SIRT1基因核心启动子区,且核心启动子在293T细胞中有较高的活性.AML1-ETO通过促进SIRT1启动子的活性对其进行转录调控.
목적:본연구지재분석AML1-ETO양성백혈병중SIRT1기인적표체급조공궤리,심조SIRT1핵심계동자구역.방법:이용실시정량PCR방법재AML1-ETO양성백혈병세포주화백혈병림상양본중연구SIRT1기인적표체정황;구건SIRT1기인계동자-형광소매보고재체,분석기재293T세포중적활성.채용PCR방법종함유SIRT1기인전록기시위점5'구적기인편단중확증SIRT1기인핵심계동자서렬,삽입경Xho Ⅰ화HindⅢ쌍매절적형광소매보고재체pGL3-Basic,채용양리자지질체SuperFect포과형광소매보고중조자전염293T세포,응용쌍형광소매검측시제합측정형광소매활성.채용쌍형광소매보고기인검측방법,연구AML1-ETO대SIRT1계동자전록활성적조절작용.결과:AML1-ETO적표체여SIRT1적표체정정상관;성공구건료6충SIRT1기인서렬적형광소매보고중조자,병통과료매절이급기인측서방법적감정;형광소매보고중조자재293T세포중적형광소매활성명현고우음성대조,명학료SIRT1기인핵심계동자위치;연구결과증명융합단백AML1-ETO가이정향조공SIRT1계동자활성,SIRT1대AML1-ETO양성백혈병발생발전적영향.연구표명:SIRT1가능시AML1-ETO적파기인지일.결론:성공구건료SIRT1기인계동자-형광소매보고재체,조도료SIRT1기인핵심계동자구,차핵심계동자재293T세포중유교고적활성.AML1-ETO통과촉진SIRT1계동자적활성대기진행전록조공.