CAJ | 학술논문

根据Genbank上痘病毒TK基因序列分别设计左右同源臂引物TKL-F/R和TKR-F/R,以FPV基因组为模板,扩增左右同源重组臂(TKL、TKR);PCR连接左右同源臂,使中间带有多酶切位点MCS,然后连入pBluescript Ⅱ SK(+)骨架质粒,获得的阳性质粒命名为pTK;合成反向串联表达盒:p7.5-MCS 1-SV40-MCS 2-P11,将表达盒插入质粒pTK的MCS位点,筛选获得阳性质粒pTKS;在鸡痘病毒早期启动子P7.5后的MCS 1处插入MDPV VP3基因,晚期启动子P11后的MCS 2处插入EGFP BGH pA,从而构建MDPV VP3基因重组鸡痘病毒转移载体pTKS-VP3-EGFP,对构建好的转移载体进行酶切和测序鉴定.将转移载体pTKS-VP3-EGFP转染鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)后,经RT-PCR和绿色荧光蛋白基因表达鉴定了MDPV VP3基因的表达,为进一步研制安全、高效的MDPV重组鸡痘病毒疫苗奠定了基础.
근거Genbank상두병독TK기인서렬분별설계좌우동원비인물TKL-F/R화TKR-F/R,이FPV기인조위모판,확증좌우동원중조비(TKL、TKR);PCR련접좌우동원비,사중간대유다매절위점MCS,연후련입pBluescript Ⅱ SK(+)골가질립,획득적양성질립명명위pTK;합성반향천련표체합:p7.5-MCS 1-SV40-MCS 2-P11,장표체합삽입질립pTK적MCS위점,사선획득양성질립pTKS;재계두병독조기계동자P7.5후적MCS 1처삽입MDPV VP3기인,만기계동자P11후적MCS 2처삽입EGFP BGH pA,종이구건MDPV VP3기인중조계두병독전이재체pTKS-VP3-EGFP,대구건호적전이재체진행매절화측서감정.장전이재체pTKS-VP3-EGFP전염계두병독감염적계배성섬유세포(CEF)후,경RT-PCR화록색형광단백기인표체감정료MDPV VP3기인적표체,위진일보연제안전、고효적MDPV중조계두병독역묘전정료기출.