新疆农业科学
新疆農業科學
신강농업과학
XINJIANG AGRICULTURAL SCIENCES
2015年
3期
560-565
,共6页
曾国航%徐宏伟%潘伊微%贾山岭%曹玉华%李莲瑞
曾國航%徐宏偉%潘伊微%賈山嶺%曹玉華%李蓮瑞
증국항%서굉위%반이미%가산령%조옥화%리련서
多浪羊IL-1β基因%地高辛%探针标记%检测
多浪羊IL-1β基因%地高辛%探針標記%檢測
다랑양IL-1β기인%지고신%탐침표기%검측
Duolang sheep IL-1β gene%Digoxigenin%labeled DNA probe%detectio
[目的]IL-1β是一种多效的促炎因子,在细胞因子炎性反应中为重要介质,处于介导炎性反应的重要因子,在造血和免疫活性中都发挥重要的作用.该实验结果为进一步研究绵羊分子免疫学,从多浪羊外周血淋巴细胞cDNA文库的筛选基因,寻找与IL-1β相关的新基因奠定基础.[方法]将构建好的多浪羊的pMD-18T-lL-1β质粒[1]进行PCR扩增,经过切胶回收,目的基因的浓缩后,采用罗氏地高辛标记和检测试剂金标记IL-1β基因,获得IL-1β地高辛探针,进行敏感性检测,在Hybond N+膜上显影,计算探针浓度.[结果]计算出标记后的探针浓度为17.1 g/mL.[结论]通过southern杂交可以得知,Hybond N+膜上有IL-1β基因的双链DNA,标准杂交液中为DIG标记的IL-1β基因单链DNA,通过避光显色,在Hybond N+膜有深紫色的杂交条带,证明探针的浓度达到标准浓度.
[目的]IL-1β是一種多效的促炎因子,在細胞因子炎性反應中為重要介質,處于介導炎性反應的重要因子,在造血和免疫活性中都髮揮重要的作用.該實驗結果為進一步研究綿羊分子免疫學,從多浪羊外週血淋巴細胞cDNA文庫的篩選基因,尋找與IL-1β相關的新基因奠定基礎.[方法]將構建好的多浪羊的pMD-18T-lL-1β質粒[1]進行PCR擴增,經過切膠迴收,目的基因的濃縮後,採用囉氏地高辛標記和檢測試劑金標記IL-1β基因,穫得IL-1β地高辛探針,進行敏感性檢測,在Hybond N+膜上顯影,計算探針濃度.[結果]計算齣標記後的探針濃度為17.1 g/mL.[結論]通過southern雜交可以得知,Hybond N+膜上有IL-1β基因的雙鏈DNA,標準雜交液中為DIG標記的IL-1β基因單鏈DNA,通過避光顯色,在Hybond N+膜有深紫色的雜交條帶,證明探針的濃度達到標準濃度.
[목적]IL-1β시일충다효적촉염인자,재세포인자염성반응중위중요개질,처우개도염성반응적중요인자,재조혈화면역활성중도발휘중요적작용.해실험결과위진일보연구면양분자면역학,종다랑양외주혈림파세포cDNA문고적사선기인,심조여IL-1β상관적신기인전정기출.[방법]장구건호적다랑양적pMD-18T-lL-1β질립[1]진행PCR확증,경과절효회수,목적기인적농축후,채용라씨지고신표기화검측시제금표기IL-1β기인,획득IL-1β지고신탐침,진행민감성검측,재Hybond N+막상현영,계산탐침농도.[결과]계산출표기후적탐침농도위17.1 g/mL.[결론]통과southern잡교가이득지,Hybond N+막상유IL-1β기인적쌍련DNA,표준잡교액중위DIG표기적IL-1β기인단련DNA,통과피광현색,재Hybond N+막유심자색적잡교조대,증명탐침적농도체도표준농도.
