复旦学报（医学版）
複旦學報（醫學版）
복단학보（의학판）
FUDAN UNIVERSITY JOURNAL OF MEDICAL SCIENCES
2015年
2期
191-197,203
,共8页
丁巧灵%王金凤%徐小雅%周轶%金慰芳%王洪复%高建军
丁巧靈%王金鳳%徐小雅%週軼%金慰芳%王洪複%高建軍
정교령%왕금봉%서소아%주질%금위방%왕홍복%고건군
成骨细胞%大豆苷原(DAI)%雌激素%碱性磷酸酶(ALP)%大鼠
成骨細胞%大豆苷原(DAI)%雌激素%堿性燐痠酶(ALP)%大鼠
성골세포%대두감원(DAI)%자격소%감성린산매(ALP)%대서
osteoblast%daidzein (DAI)%estrogen%alkaline phosphatase (ALP)%rat
目的 观察基础雌激素(estrogen)水平对大豆苷原(daizein,DAI)促成骨细胞分化作用的影响.方法 采用酶消化法分离培养新生SD大鼠头盖骨成骨细胞,通过培养液中添加17β-雌二醇改变培养微环境(包括空白对照)雌激素水平,应用MTT法和对硝基苯磷酸盐(p-nitropheny-phosate,PNPP)法检测细胞增殖率和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,应用real-time PCR法检测其雌激素受体α(ERa)、雌激素受体β(ERβ)和过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR)γ的mRNA水平变化,研究雌激素基础水平变化对DAI促成骨细胞分化作用的影响.结果 培养环境中雌二醇水平升高致DAI的促分化作用减弱.其中100 nmol/L DAI组ALP比活性较对照组的增幅由雌激素补充前的23％分别降至8％(17β-雌二醇为100 pmol/L)和-11％(17β-雌二醇为1 000 pmol/L),显示基础雌激素水平对DAI促分化的拮抗作用.为避免培养液中血清雌激素的可能影响,进一步采用去激素血清培养(含2％去激素胎牛血清).此时补充17β-雌二醇至100 pmol/L,DAI各剂量组细胞ALP比活性较对照组明显增加(16％～21％,P＜0.05).继续补充雌激素至1 000和10 000 pmol/L时,其作用反而减弱.该结果显示,DAI促成骨细胞分化作用与雌激素基础水平有关,低雌激素状态(≤100 pmol/L)可增强其作用.为进一步探索其作用机制,我们初步观察了雌激素(100pmol/L)和DAI(100 nmol/L)单独或联合作用下成骨细胞ERa、ERβ和PPARγ受体表达变化.结果显示,100pmol/L 17β-雌二醇明显上调ERβ表达,并部分抵抗DAI下调ERβ的作用.结论 DAI的促成骨分化作用与基础雌激素水平有关,低雌激素(≤100 pmol/L)状态有利于DAI的促分化作用,而雌激素水平升高可减弱其促分化作用.
目的 觀察基礎雌激素(estrogen)水平對大豆苷原(daizein,DAI)促成骨細胞分化作用的影響.方法 採用酶消化法分離培養新生SD大鼠頭蓋骨成骨細胞,通過培養液中添加17β-雌二醇改變培養微環境(包括空白對照)雌激素水平,應用MTT法和對硝基苯燐痠鹽(p-nitropheny-phosate,PNPP)法檢測細胞增殖率和堿性燐痠酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,應用real-time PCR法檢測其雌激素受體α(ERa)、雌激素受體β(ERβ)和過氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR)γ的mRNA水平變化,研究雌激素基礎水平變化對DAI促成骨細胞分化作用的影響.結果 培養環境中雌二醇水平升高緻DAI的促分化作用減弱.其中100 nmol/L DAI組ALP比活性較對照組的增幅由雌激素補充前的23％分彆降至8％(17β-雌二醇為100 pmol/L)和-11％(17β-雌二醇為1 000 pmol/L),顯示基礎雌激素水平對DAI促分化的拮抗作用.為避免培養液中血清雌激素的可能影響,進一步採用去激素血清培養(含2％去激素胎牛血清).此時補充17β-雌二醇至100 pmol/L,DAI各劑量組細胞ALP比活性較對照組明顯增加(16％～21％,P＜0.05).繼續補充雌激素至1 000和10 000 pmol/L時,其作用反而減弱.該結果顯示,DAI促成骨細胞分化作用與雌激素基礎水平有關,低雌激素狀態(≤100 pmol/L)可增彊其作用.為進一步探索其作用機製,我們初步觀察瞭雌激素(100pmol/L)和DAI(100 nmol/L)單獨或聯閤作用下成骨細胞ERa、ERβ和PPARγ受體錶達變化.結果顯示,100pmol/L 17β-雌二醇明顯上調ERβ錶達,併部分牴抗DAI下調ERβ的作用.結論 DAI的促成骨分化作用與基礎雌激素水平有關,低雌激素(≤100 pmol/L)狀態有利于DAI的促分化作用,而雌激素水平升高可減弱其促分化作用.
목적 관찰기출자격소(estrogen)수평대대두감원(daizein,DAI)촉성골세포분화작용적영향.방법 채용매소화법분리배양신생SD대서두개골성골세포,통과배양액중첨가17β-자이순개변배양미배경(포괄공백대조)자격소수평,응용MTT법화대초기분린산염(p-nitropheny-phosate,PNPP)법검측세포증식솔화감성린산매(alkaline phosphatase,ALP)활성,응용real-time PCR법검측기자격소수체α(ERa)、자격소수체β(ERβ)화과양화물매체증식물격활수체(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR)γ적mRNA수평변화,연구자격소기출수평변화대DAI촉성골세포분화작용적영향.결과 배양배경중자이순수평승고치DAI적촉분화작용감약.기중100 nmol/L DAI조ALP비활성교대조조적증폭유자격소보충전적23％분별강지8％(17β-자이순위100 pmol/L)화-11％(17β-자이순위1 000 pmol/L),현시기출자격소수평대DAI촉분화적길항작용.위피면배양액중혈청자격소적가능영향,진일보채용거격소혈청배양(함2％거격소태우혈청).차시보충17β-자이순지100 pmol/L,DAI각제량조세포ALP비활성교대조조명현증가(16％～21％,P＜0.05).계속보충자격소지1 000화10 000 pmol/L시,기작용반이감약.해결과현시,DAI촉성골세포분화작용여자격소기출수평유관,저자격소상태(≤100 pmol/L)가증강기작용.위진일보탐색기작용궤제,아문초보관찰료자격소(100pmol/L)화DAI(100 nmol/L)단독혹연합작용하성골세포ERa、ERβ화PPARγ수체표체변화.결과현시,100pmol/L 17β-자이순명현상조ERβ표체,병부분저항DAI하조ERβ적작용.결론 DAI적촉성골분화작용여기출자격소수평유관,저자격소(≤100 pmol/L)상태유리우DAI적촉분화작용,이자격소수평승고가감약기촉분화작용.
