畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2015年
5期
16-19
,共4页
郭天玲%杨咪%刘浩%校海霞
郭天玲%楊咪%劉浩%校海霞
곽천령%양미%류호%교해하
禽流感病毒%H7N9%血凝素蛋白%293T细胞%Western blot%ELISA
禽流感病毒%H7N9%血凝素蛋白%293T細胞%Western blot%ELISA
금류감병독%H7N9%혈응소단백%293T세포%Western blot%ELISA
avian influenza virus%H7N9%hemagglutinin%293T cells%Western blot%ELISA
目的:通过哺乳动物细胞表达出禽源H7 N9流感表面HA蛋白,并鉴定其抗原性.方法:通过引物设计,利用融合PCR方法扩增得到H7N9禽流感HA基因,以pCAGGS为表达载体构建重组质粒pCAGGS-H7-thrombin.测序正确后将重组质粒转染293T细胞.经72 h后收获上清,通过镍柱和凝胶层析柱纯化后得到目的蛋白.Western blot和ELISA结果鉴定纯化的H7蛋白的抗原性.结果:293T细胞表达的上清经HisTrapTMHP纯化后过Superdex 200 10/300 GL分子筛,在洗脱体积达到11 mL左右出峰,由出峰位置判断其为H7三聚体.Western blot检测在60 ku左右有一条阳性条带,ELISA检测其对抗H7 N9小鼠阳性血清有很高的反应值.试验成功表达禽流感病毒H7 N9的H7蛋白,并且针对H7 N9的阳性血清有较高的灵敏性,为进一步研究H7N9亚单位疫苗奠定了基础.
目的:通過哺乳動物細胞錶達齣禽源H7 N9流感錶麵HA蛋白,併鑒定其抗原性.方法:通過引物設計,利用融閤PCR方法擴增得到H7N9禽流感HA基因,以pCAGGS為錶達載體構建重組質粒pCAGGS-H7-thrombin.測序正確後將重組質粒轉染293T細胞.經72 h後收穫上清,通過鎳柱和凝膠層析柱純化後得到目的蛋白.Western blot和ELISA結果鑒定純化的H7蛋白的抗原性.結果:293T細胞錶達的上清經HisTrapTMHP純化後過Superdex 200 10/300 GL分子篩,在洗脫體積達到11 mL左右齣峰,由齣峰位置判斷其為H7三聚體.Western blot檢測在60 ku左右有一條暘性條帶,ELISA檢測其對抗H7 N9小鼠暘性血清有很高的反應值.試驗成功錶達禽流感病毒H7 N9的H7蛋白,併且針對H7 N9的暘性血清有較高的靈敏性,為進一步研究H7N9亞單位疫苗奠定瞭基礎.
목적:통과포유동물세포표체출금원H7 N9류감표면HA단백,병감정기항원성.방법:통과인물설계,이용융합PCR방법확증득도H7N9금류감HA기인,이pCAGGS위표체재체구건중조질립pCAGGS-H7-thrombin.측서정학후장중조질립전염293T세포.경72 h후수획상청,통과얼주화응효층석주순화후득도목적단백.Western blot화ELISA결과감정순화적H7단백적항원성.결과:293T세포표체적상청경HisTrapTMHP순화후과Superdex 200 10/300 GL분자사,재세탈체적체도11 mL좌우출봉,유출봉위치판단기위H7삼취체.Western blot검측재60 ku좌우유일조양성조대,ELISA검측기대항H7 N9소서양성혈청유흔고적반응치.시험성공표체금류감병독H7 N9적H7단백,병차침대H7 N9적양성혈청유교고적령민성,위진일보연구H7N9아단위역묘전정료기출.
