CAJ | 학술논문

目的:应用基因沉默技术,观察下调20S蛋白酶体β5亚单位(PSMB5)对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)增殖能力的影响及其潜在机制,寻求调节干细胞活力的关键靶点.方法:构建PSMB5-shRNA慢病毒载体感染早期hBMSCs,根据感染条件不同将细胞分为绿色荧光蛋白(GFP)对照组和shRNA组.倒置荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR和免疫印迹检测PSMB5沉默效率,荧光分光光度法检测蛋白酶体活性;BrdU掺入实验观察PSMB5基因沉默对早期hBMSCs增殖潜能的影响,流式细胞术检测细胞周期分布,免疫印迹检测细胞周期相关蛋白1(cyclin D1)及其激酶CDK4的表达变化.结果:慢病毒感染早期hBMSCs 72 h可见约95％以上细胞表达绿色荧光蛋白.shRNA组PSMB5 mRNA和蛋白表达水平较GFP对照组分别降低93.31％±0.59％和56.83％±13.31％,且蛋白酶体活性较对照组降低37.47％±0.41％.此外,shRNA组BrdU阳性率26.14％±8.13％较对照组49.53％±11.18％显著降低,G1期细胞较GFP对照组增多,而S期和G2/M期细胞却较对照组减少,Cyclin D1和CDK4的表达水平分别下降54.55％±7.76％和63.26％±15.76％.结论:PSMB5基因沉默能够下调Cyclin D1和CDK4的表达,导致细胞G1/S转换停滞,影响hBMSCs增殖潜能.
목적:응용기인침묵기술,관찰하조20S단백매체β5아단위(PSMB5)대인골수간충질간세포(hBMSCs)증식능력적영향급기잠재궤제,심구조절간세포활력적관건파점.방법:구건PSMB5-shRNA만병독재체감염조기hBMSCs,근거감염조건불동장세포분위록색형광단백(GFP)대조조화shRNA조.도치형광현미경관찰전염효솔,RT-PCR화면역인적검측PSMB5침묵효솔,형광분광광도법검측단백매체활성;BrdU참입실험관찰PSMB5기인침묵대조기hBMSCs증식잠능적영향,류식세포술검측세포주기분포,면역인적검측세포주기상관단백1(cyclin D1)급기격매CDK4적표체변화.결과:만병독감염조기hBMSCs 72 h가견약95％이상세포표체록색형광단백.shRNA조PSMB5 mRNA화단백표체수평교GFP대조조분별강저93.31％±0.59％화56.83％±13.31％,차단백매체활성교대조조강저37.47％±0.41％.차외,shRNA조BrdU양성솔26.14％±8.13％교대조조49.53％±11.18％현저강저,G1기세포교GFP대조조증다,이S기화G2/M기세포각교대조조감소,Cyclin D1화CDK4적표체수평분별하강54.55％±7.76％화63.26％±15.76％.결론:PSMB5기인침묵능구하조Cyclin D1화CDK4적표체,도치세포G1/S전환정체,영향hBMSCs증식잠능.