中国脊柱脊髓杂志
中國脊柱脊髓雜誌
중국척주척수잡지
CHINESE JOURNAL OF SPINE AND SPINAL CORD
2015年
4期
361-366
,共6页
胡津铨%袁文%曹鹏%杨晨%高阳%石长贵
鬍津銓%袁文%曹鵬%楊晨%高暘%石長貴
호진전%원문%조붕%양신%고양%석장귀
骨髓间充质干细胞%椎间盘退行性变%髓核细胞%凋亡%共培养
骨髓間充質榦細胞%椎間盤退行性變%髓覈細胞%凋亡%共培養
골수간충질간세포%추간반퇴행성변%수핵세포%조망%공배양
Mesenchymal stem cells%Disc degeneration%Nucleus pulposus cell%Apoptosis%Co-culture system
目的:观察大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)与髓核细胞(NPCs)共培养对白介素1β(IL-1β)致NPCs退变的影响.方法:在体外分别分离培养大鼠NPCs和BMSCs,分别传至第3代,采用流式细胞仪鉴定BMSCs纯度,分别测定CD29、CD31、CD45、CD90表型.取第3代NPCs分为3组:A组,无IL-1β干预,不与BMSCs共培养,设为对照组;B组,用IL-1β干预NPCs后不与BMSCs共培养;C组,用IL-1β干预NPCs后与BMSCs细胞借由transwell小室间接共培养.IL-1β干预时间和BMSCs共培养时间均为24h,之后取出transwell,将3组NPCs通过实时定量荧光PCR(RT-PCR)观察其解聚蛋白样金属蛋白-4(ADAMTS-4)、解聚蛋白样金属蛋白酶-5(ADAMTS-5)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)基因表达量,同时通过Annexin V-FITC/propidium iodide (PI)凋亡试剂盒和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)试剂盒观察3组NPCs凋亡情况.结果:流式细胞鉴定结果显示90％以上的BMSCs表现为CD29、CD90阳性,小于5％的BMSCs表现为CD31、CD45阳性,细胞纯度较好.3组NPCs中ADAMTS-4、ADAMTS-5、MMP-13的基因相对表达量:A组为0.98±0.19、1.10±0.08、1.21±0.24,B组为5.23±0.25、6.92±2.33、23.39±0.09,C组为2.31±0.26、3.33±1.52、12.68±0.11,与A组比较,B、C组均明显升高(P＜0.05),C组与B组比较均明显降低(P＜0.05).Caspase-3活性相对表达量A组为1.20±0.18,B组为5.92±0.93,C组为2.33±0.52,与A组比较,B、C组明显升高(P＜0.05),C组与B组比较明显降低(P＜0.05).细胞凋亡率A组为4.2±2.2,B组为17.1±3.7,C组为10.5±2.4,与A组比较,B、C组明显升高(P＜0.05),C组与B组比较明显降低(P＜0.05).结论:与BMSCs共培养可有效降低IL-1β致NPCs退变相关因子的基因表达,减少细胞凋亡;BMSCs可作为种子细胞对椎间盘炎性环境起到“治疗”作用.
目的:觀察大鼠骨髓間充質榦細胞(BMSCs)與髓覈細胞(NPCs)共培養對白介素1β(IL-1β)緻NPCs退變的影響.方法:在體外分彆分離培養大鼠NPCs和BMSCs,分彆傳至第3代,採用流式細胞儀鑒定BMSCs純度,分彆測定CD29、CD31、CD45、CD90錶型.取第3代NPCs分為3組:A組,無IL-1β榦預,不與BMSCs共培養,設為對照組;B組,用IL-1β榦預NPCs後不與BMSCs共培養;C組,用IL-1β榦預NPCs後與BMSCs細胞藉由transwell小室間接共培養.IL-1β榦預時間和BMSCs共培養時間均為24h,之後取齣transwell,將3組NPCs通過實時定量熒光PCR(RT-PCR)觀察其解聚蛋白樣金屬蛋白-4(ADAMTS-4)、解聚蛋白樣金屬蛋白酶-5(ADAMTS-5)、基質金屬蛋白酶-13(MMP-13)基因錶達量,同時通過Annexin V-FITC/propidium iodide (PI)凋亡試劑盒和半胱氨痠天鼕氨痠蛋白酶-3(Caspase-3)試劑盒觀察3組NPCs凋亡情況.結果:流式細胞鑒定結果顯示90％以上的BMSCs錶現為CD29、CD90暘性,小于5％的BMSCs錶現為CD31、CD45暘性,細胞純度較好.3組NPCs中ADAMTS-4、ADAMTS-5、MMP-13的基因相對錶達量:A組為0.98±0.19、1.10±0.08、1.21±0.24,B組為5.23±0.25、6.92±2.33、23.39±0.09,C組為2.31±0.26、3.33±1.52、12.68±0.11,與A組比較,B、C組均明顯升高(P＜0.05),C組與B組比較均明顯降低(P＜0.05).Caspase-3活性相對錶達量A組為1.20±0.18,B組為5.92±0.93,C組為2.33±0.52,與A組比較,B、C組明顯升高(P＜0.05),C組與B組比較明顯降低(P＜0.05).細胞凋亡率A組為4.2±2.2,B組為17.1±3.7,C組為10.5±2.4,與A組比較,B、C組明顯升高(P＜0.05),C組與B組比較明顯降低(P＜0.05).結論:與BMSCs共培養可有效降低IL-1β緻NPCs退變相關因子的基因錶達,減少細胞凋亡;BMSCs可作為種子細胞對椎間盤炎性環境起到“治療”作用.
목적:관찰대서골수간충질간세포(BMSCs)여수핵세포(NPCs)공배양대백개소1β(IL-1β)치NPCs퇴변적영향.방법:재체외분별분리배양대서NPCs화BMSCs,분별전지제3대,채용류식세포의감정BMSCs순도,분별측정CD29、CD31、CD45、CD90표형.취제3대NPCs분위3조:A조,무IL-1β간예,불여BMSCs공배양,설위대조조;B조,용IL-1β간예NPCs후불여BMSCs공배양;C조,용IL-1β간예NPCs후여BMSCs세포차유transwell소실간접공배양.IL-1β간예시간화BMSCs공배양시간균위24h,지후취출transwell,장3조NPCs통과실시정량형광PCR(RT-PCR)관찰기해취단백양금속단백-4(ADAMTS-4)、해취단백양금속단백매-5(ADAMTS-5)、기질금속단백매-13(MMP-13)기인표체량,동시통과Annexin V-FITC/propidium iodide (PI)조망시제합화반광안산천동안산단백매-3(Caspase-3)시제합관찰3조NPCs조망정황.결과:류식세포감정결과현시90％이상적BMSCs표현위CD29、CD90양성,소우5％적BMSCs표현위CD31、CD45양성,세포순도교호.3조NPCs중ADAMTS-4、ADAMTS-5、MMP-13적기인상대표체량:A조위0.98±0.19、1.10±0.08、1.21±0.24,B조위5.23±0.25、6.92±2.33、23.39±0.09,C조위2.31±0.26、3.33±1.52、12.68±0.11,여A조비교,B、C조균명현승고(P＜0.05),C조여B조비교균명현강저(P＜0.05).Caspase-3활성상대표체량A조위1.20±0.18,B조위5.92±0.93,C조위2.33±0.52,여A조비교,B、C조명현승고(P＜0.05),C조여B조비교명현강저(P＜0.05).세포조망솔A조위4.2±2.2,B조위17.1±3.7,C조위10.5±2.4,여A조비교,B、C조명현승고(P＜0.05),C조여B조비교명현강저(P＜0.05).결론:여BMSCs공배양가유효강저IL-1β치NPCs퇴변상관인자적기인표체,감소세포조망;BMSCs가작위충자세포대추간반염성배경기도“치료”작용.
