中国动物传染病学报
中國動物傳染病學報
중국동물전염병학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY PARASITOLOGY
2015年
2期
7-14
,共8页
孙涛%李传峰%徐彪%邓明俊%岳志芹
孫濤%李傳峰%徐彪%鄧明俊%嶽誌芹
손도%리전봉%서표%산명준%악지근
鸭甲肝病毒%VP1%抗原域%间接ELISA
鴨甲肝病毒%VP1%抗原域%間接ELISA
압갑간병독%VP1%항원역%간접ELISA
Duck hepatitis A virus%VP1%antigen domain%indirect ELISA
根据已发表的鸭甲肝病毒(Duck hepatitis A virus,DHAV)疫苗株A66株基因组序列,利用生物学分析软件DNAStar进行VP1蛋白的二级结构和抗原域预测,确定其主要抗原域(major antigen domain of VP1,VP1M),设计并合成一对可扩增VP1M 的特异性引物,PCR扩增获得长为327 bp的VP1M基因片段.将VP1M基因片段定向克隆至pGEX-4T-1表达载体中,鉴定正确后进行IPTG诱导表达,获得了以包涵体为主的重组蛋白.重组蛋白纯化后,经过Western blot检测表明重组蛋白具有良好的抗原性.以该蛋白作为包被抗原,成功建立了检测DHAV-1的间接ELISA方法.该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,为DHAV的快速诊断、流行病学调查和免疫鸭群的抗体检测提供了快速实用的检测手段.
根據已髮錶的鴨甲肝病毒(Duck hepatitis A virus,DHAV)疫苗株A66株基因組序列,利用生物學分析軟件DNAStar進行VP1蛋白的二級結構和抗原域預測,確定其主要抗原域(major antigen domain of VP1,VP1M),設計併閤成一對可擴增VP1M 的特異性引物,PCR擴增穫得長為327 bp的VP1M基因片段.將VP1M基因片段定嚮剋隆至pGEX-4T-1錶達載體中,鑒定正確後進行IPTG誘導錶達,穫得瞭以包涵體為主的重組蛋白.重組蛋白純化後,經過Western blot檢測錶明重組蛋白具有良好的抗原性.以該蛋白作為包被抗原,成功建立瞭檢測DHAV-1的間接ELISA方法.該方法具有良好的特異性、敏感性和重複性,為DHAV的快速診斷、流行病學調查和免疫鴨群的抗體檢測提供瞭快速實用的檢測手段.
근거이발표적압갑간병독(Duck hepatitis A virus,DHAV)역묘주A66주기인조서렬,이용생물학분석연건DNAStar진행VP1단백적이급결구화항원역예측,학정기주요항원역(major antigen domain of VP1,VP1M),설계병합성일대가확증VP1M 적특이성인물,PCR확증획득장위327 bp적VP1M기인편단.장VP1M기인편단정향극륭지pGEX-4T-1표체재체중,감정정학후진행IPTG유도표체,획득료이포함체위주적중조단백.중조단백순화후,경과Western blot검측표명중조단백구유량호적항원성.이해단백작위포피항원,성공건립료검측DHAV-1적간접ELISA방법.해방법구유량호적특이성、민감성화중복성,위DHAV적쾌속진단、류행병학조사화면역압군적항체검측제공료쾌속실용적검측수단.
