中国动物传染病学报
中國動物傳染病學報
중국동물전염병학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY PARASITOLOGY
2015年
2期
1-6
,共6页
朱杰%缪秋红%郭慧敏%谭永贵%李传峰%孟春春%陈宗艳%刘光清
硃傑%繆鞦紅%郭慧敏%譚永貴%李傳峰%孟春春%陳宗豔%劉光清
주걸%무추홍%곽혜민%담영귀%리전봉%맹춘춘%진종염%류광청
兔岩藻糖基转移酶%RK13细胞%兔病毒性出血症病毒
兔巖藻糖基轉移酶%RK13細胞%兔病毒性齣血癥病毒
토암조당기전이매%RK13세포%토병독성출혈증병독
Rabbit fucosyltransferase%RK13 cell%Rabbit hemorrhagic disease virus
为了构建稳定表达兔岩藻糖基转移酶(fucosyltransferase,FUT2)的RK13细胞系,本研究将FUT2基因编码序列插入到慢病毒载体pLOV-GFP-3Flag中,构建了pLOV-3Flag-FUT2重组质粒.将pLOV-3Flag-FUT2与包装质粒psPAX2和外膜质粒pMD2.G共转染293T细胞,获得重组病毒样颗粒.用含病毒样颗粒的细胞培养上清液感染RK13细胞,并通过嘌呤霉素筛选、纯化,获得稳定表达FUT2的细胞系,命名为RK-FUT2细胞.连续培养10代后,利用PCR、RT-PCR和Western blot方法鉴定,结果表明,RK-FUT2细胞系能够稳定表达兔岩藻糖基转移酶.该细胞系为研究FUT2在兔病毒性出血症病毒(Rabbit hemorrhagic diseasevirus,RHDV)感染过程和致病机制中的作用提供了有力工具.
為瞭構建穩定錶達兔巖藻糖基轉移酶(fucosyltransferase,FUT2)的RK13細胞繫,本研究將FUT2基因編碼序列插入到慢病毒載體pLOV-GFP-3Flag中,構建瞭pLOV-3Flag-FUT2重組質粒.將pLOV-3Flag-FUT2與包裝質粒psPAX2和外膜質粒pMD2.G共轉染293T細胞,穫得重組病毒樣顆粒.用含病毒樣顆粒的細胞培養上清液感染RK13細胞,併通過嘌呤黴素篩選、純化,穫得穩定錶達FUT2的細胞繫,命名為RK-FUT2細胞.連續培養10代後,利用PCR、RT-PCR和Western blot方法鑒定,結果錶明,RK-FUT2細胞繫能夠穩定錶達兔巖藻糖基轉移酶.該細胞繫為研究FUT2在兔病毒性齣血癥病毒(Rabbit hemorrhagic diseasevirus,RHDV)感染過程和緻病機製中的作用提供瞭有力工具.
위료구건은정표체토암조당기전이매(fucosyltransferase,FUT2)적RK13세포계,본연구장FUT2기인편마서렬삽입도만병독재체pLOV-GFP-3Flag중,구건료pLOV-3Flag-FUT2중조질립.장pLOV-3Flag-FUT2여포장질립psPAX2화외막질립pMD2.G공전염293T세포,획득중조병독양과립.용함병독양과립적세포배양상청액감염RK13세포,병통과표령매소사선、순화,획득은정표체FUT2적세포계,명명위RK-FUT2세포.련속배양10대후,이용PCR、RT-PCR화Western blot방법감정,결과표명,RK-FUT2세포계능구은정표체토암조당기전이매.해세포계위연구FUT2재토병독성출혈증병독(Rabbit hemorrhagic diseasevirus,RHDV)감염과정화치병궤제중적작용제공료유력공구.
