质谱学报
質譜學報
질보학보
2015年
3期
249-254
,共6页
陈光照%杨柳青%文娟%葛苗苗%张立坚%蔡春
陳光照%楊柳青%文娟%葛苗苗%張立堅%蔡春
진광조%양류청%문연%갈묘묘%장립견%채춘
5-羟甲基胞嘧啶(5hmC)%液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)%DNA羟甲基化%血液%大鼠
5-羥甲基胞嘧啶(5hmC)%液相色譜-串聯質譜(LC-MS/MS)%DNA羥甲基化%血液%大鼠
5-간갑기포밀정(5hmC)%액상색보-천련질보(LC-MS/MS)%DNA간갑기화%혈액%대서
5-hydroxymethylcytosing (5hmC)%liquid chromatography-tandem mass spectrometry(LC-MS/MS)%DNA hydroxymethylation%blood%rat
5-羟甲基胞嘧啶(5-hydroxymethyleytosine,5hmC)是由TET蛋白家族催化氧化5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,5mC)生成的,对哺乳动物的基因转录和表达发挥着重要的调控作用.本研究建立了血液样品中5hmC的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定方法,采用试剂盒法提取血液基因组DNA,在甲酸环境下加热裂解,采用HILIC色谱柱分离,电喷雾电离和多反应监测模式定量.结果表明:5hmC在0.1～50 μg/L范围内线性关系良好,相关系数为0.999 4;高、中、低3个加标水平的平均回收率为95.87％,日内和日间的相对标准偏差分别为3.42％和4.12％;5hmC的检出限(LOD,S/N=3)为0.050 μg/L,定量限(LOQ,S/N=10)为0.100 μg/L.该方法准确、快速、稳定、灵敏,可用于血液样品全基因组中5-羟甲基胞嘧啶的检测分析.
5-羥甲基胞嘧啶(5-hydroxymethyleytosine,5hmC)是由TET蛋白傢族催化氧化5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,5mC)生成的,對哺乳動物的基因轉錄和錶達髮揮著重要的調控作用.本研究建立瞭血液樣品中5hmC的液相色譜-串聯質譜(LC-MS/MS)測定方法,採用試劑盒法提取血液基因組DNA,在甲痠環境下加熱裂解,採用HILIC色譜柱分離,電噴霧電離和多反應鑑測模式定量.結果錶明:5hmC在0.1～50 μg/L範圍內線性關繫良好,相關繫數為0.999 4;高、中、低3箇加標水平的平均迴收率為95.87％,日內和日間的相對標準偏差分彆為3.42％和4.12％;5hmC的檢齣限(LOD,S/N=3)為0.050 μg/L,定量限(LOQ,S/N=10)為0.100 μg/L.該方法準確、快速、穩定、靈敏,可用于血液樣品全基因組中5-羥甲基胞嘧啶的檢測分析.
5-간갑기포밀정(5-hydroxymethyleytosine,5hmC)시유TET단백가족최화양화5-갑기포밀정(5-methylcytosine,5mC)생성적,대포유동물적기인전록화표체발휘착중요적조공작용.본연구건립료혈액양품중5hmC적액상색보-천련질보(LC-MS/MS)측정방법,채용시제합법제취혈액기인조DNA,재갑산배경하가열렬해,채용HILIC색보주분리,전분무전리화다반응감측모식정량.결과표명:5hmC재0.1～50 μg/L범위내선성관계량호,상관계수위0.999 4;고、중、저3개가표수평적평균회수솔위95.87％,일내화일간적상대표준편차분별위3.42％화4.12％;5hmC적검출한(LOD,S/N=3)위0.050 μg/L,정량한(LOQ,S/N=10)위0.100 μg/L.해방법준학、쾌속、은정、령민,가용우혈액양품전기인조중5-간갑기포밀정적검측분석.
