遵义医学院学报
遵義醫學院學報
준의의학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE ZUNYI
2015年
2期
150-153,159
,共5页
柯棠山%董进%廖娟%刘坤祥
柯棠山%董進%廖娟%劉坤祥
가당산%동진%료연%류곤상
肌卫星细胞%细胞培养%兔
肌衛星細胞%細胞培養%兔
기위성세포%세포배양%토
目的 建立高纯度、高丰度的兔骨骼肌卫星细胞的分离、培养方法,并对培养的肌卫星细胞体外增殖和成肌特性进行观察.方法 采用改良Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶混合消化法结合差速贴壁培养以分离、纯化1周龄幼兔小腿三头肌来源的骨骼肌卫星细胞.镜下观察肌卫星细胞生长形态,结蛋白(Desmin)免疫组化染色鉴定体外培养的肌卫星细胞,MTT法绘制细胞生长曲线,并对分离培养的肌卫星细胞成肌特性进行诱导培养观察.结果 差速贴壁后的悬浮肌卫星细胞折光性强,呈透亮球形,数量较多,贴壁生长后逐渐变为长梭形;免疫组化染色检测分离培养的细胞高表达Desmin,证明为肌卫星细胞,纯度高达95％;传代培养的肌卫星细胞24h后开始增殖,第3～7天处于对数生长期,第8天后进入平台期;不经诱导分化培养基培养的肌卫星细胞也可融合形成肌管,但形成肌管速度不及诱导分化培养组快速.结论 成功建立了具有操作简便、不易污染和纯度高的兔骨骼肌卫星细胞分离、培养方法,为采用肌卫星细胞为种子细胞的再生医学研究奠定实验基础.
目的 建立高純度、高豐度的兔骨骼肌衛星細胞的分離、培養方法,併對培養的肌衛星細胞體外增殖和成肌特性進行觀察.方法 採用改良Ⅰ型膠原酶和胰蛋白酶混閤消化法結閤差速貼壁培養以分離、純化1週齡幼兔小腿三頭肌來源的骨骼肌衛星細胞.鏡下觀察肌衛星細胞生長形態,結蛋白(Desmin)免疫組化染色鑒定體外培養的肌衛星細胞,MTT法繪製細胞生長麯線,併對分離培養的肌衛星細胞成肌特性進行誘導培養觀察.結果 差速貼壁後的懸浮肌衛星細胞摺光性彊,呈透亮毬形,數量較多,貼壁生長後逐漸變為長梭形;免疫組化染色檢測分離培養的細胞高錶達Desmin,證明為肌衛星細胞,純度高達95％;傳代培養的肌衛星細胞24h後開始增殖,第3～7天處于對數生長期,第8天後進入平檯期;不經誘導分化培養基培養的肌衛星細胞也可融閤形成肌管,但形成肌管速度不及誘導分化培養組快速.結論 成功建立瞭具有操作簡便、不易汙染和純度高的兔骨骼肌衛星細胞分離、培養方法,為採用肌衛星細胞為種子細胞的再生醫學研究奠定實驗基礎.
목적 건립고순도、고봉도적토골격기위성세포적분리、배양방법,병대배양적기위성세포체외증식화성기특성진행관찰.방법 채용개량Ⅰ형효원매화이단백매혼합소화법결합차속첩벽배양이분리、순화1주령유토소퇴삼두기래원적골격기위성세포.경하관찰기위성세포생장형태,결단백(Desmin)면역조화염색감정체외배양적기위성세포,MTT법회제세포생장곡선,병대분리배양적기위성세포성기특성진행유도배양관찰.결과 차속첩벽후적현부기위성세포절광성강,정투량구형,수량교다,첩벽생장후축점변위장사형;면역조화염색검측분리배양적세포고표체Desmin,증명위기위성세포,순도고체95％;전대배양적기위성세포24h후개시증식,제3～7천처우대수생장기,제8천후진입평태기;불경유도분화배양기배양적기위성세포야가융합형성기관,단형성기관속도불급유도분화배양조쾌속.결론 성공건립료구유조작간편、불역오염화순도고적토골격기위성세포분리、배양방법,위채용기위성세포위충자세포적재생의학연구전정실험기출.
