中国医药导报
中國醫藥導報
중국의약도보
CHINA MEDICAL HERALD
2015年
10期
7-13
,共7页
聂玺%张洁%余超%谭敦勇
聶璽%張潔%餘超%譚敦勇
섭새%장길%여초%담돈용
D5 Stat5a%前列腺癌细胞%表观遗传学%组蛋白甲基化%染色质免疫共沉淀
D5 Stat5a%前列腺癌細胞%錶觀遺傳學%組蛋白甲基化%染色質免疫共沉澱
D5 Stat5a%전렬선암세포%표관유전학%조단백갑기화%염색질면역공침정
D5 Stat5a%Prostate cancer cells%Epigenetics%Histone trimethylation%Chromatin immuneprecipitation assay
目的 探讨D5 Stat5a对人类前列腺癌细胞增殖的影响及其对胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP-7)表达的影响.方法 常规培养人前列腺癌细胞(DU145及PC3),并随机分为四组:对照组及三个实验组.对照组以不含外源基因的腺病毒感染,三个实验组细胞则以携带D5 Stat5a cDNA的腺病毒感染,其病毒感染增殖活性(MOI)依次为10、20及30.四组细胞均在培养液中加入催乳素(50 ng/mL)以启动细胞信号转导.运用MTS方法检测细胞增殖;实时定量PCR检测抑癌基因IGFBP-7及EZH2 mRNA水平;染色质免疫共沉淀技术(ChIP)检测IGFBP-7基因启动子区域组蛋白甲基化程度;蛋白质印迹法检测IGFBP-7蛋白表达.结果 携带D5 Stat5a cDNA的腺病毒感染能够呈剂量依赖式地促进前列腺癌细胞(DU145及PC3)增殖.如PC3细胞,对照组细胞的相对活细胞数为(1.362±0.018),三个实验组相对活细胞数分别为(1.453±0.022)(P＞ 0.05)、(1.649±0.020)(P＜ 0.05)及(1.829±0.027)(P＜ 0.05).实时定量PCR及蛋白印迹证明D5 Stat5a过表达明显下调IGFBP-7的表达.DU145及PC3对照组细胞IGFBP-7 mRNA相对值分别为(0.796±0.023)及(0.871±0.046),而感染携带D5 Stat5a cDNA的腺病毒(MOI 30)后,其IGFBP-7 mRNA相对值则分别下降到(0.148±0.019)(P＜ 0.01)及(0.078±0.021)(P＜ 0.01).染色质免疫共沉淀分析(ChIP-Assay)证实,D5 Stat5a导致IGFBP-7基因启动子区域组蛋白甲基化(H3K27Me3)水平显著上升.DU145细胞对照组与实验组,其沉淀DNA比例分别为(0.0176±0.0030)％及(0.0650±0.0099)％,两者差异有高度统计学意义(P＜0.01).此外,实时定量PCR检测表明,D5 Stat5a引起组蛋白甲基转移酶EZH2 mRNA大幅上升.DU145细胞对照组及D5 Stat5a感染组相对mRNA水平分别为(0.0033±0.0004)及(0.0160±0.0035),两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 转录因子D5 Stat5a能够显著促进人类前列腺癌细胞的增殖,其主要的表观遗传学机制在于D5 Stat5a增加EZH2基因表达,导致抑癌基因IGFBP-7启动子区域组蛋白甲基化,使启动子活性降低,IGFBP-7表达下降,是导致前列腺癌细胞的异常增殖分子机制之一.
目的 探討D5 Stat5a對人類前列腺癌細胞增殖的影響及其對胰島素樣生長因子結閤蛋白7(IGFBP-7)錶達的影響.方法 常規培養人前列腺癌細胞(DU145及PC3),併隨機分為四組:對照組及三箇實驗組.對照組以不含外源基因的腺病毒感染,三箇實驗組細胞則以攜帶D5 Stat5a cDNA的腺病毒感染,其病毒感染增殖活性(MOI)依次為10、20及30.四組細胞均在培養液中加入催乳素(50 ng/mL)以啟動細胞信號轉導.運用MTS方法檢測細胞增殖;實時定量PCR檢測抑癌基因IGFBP-7及EZH2 mRNA水平;染色質免疫共沉澱技術(ChIP)檢測IGFBP-7基因啟動子區域組蛋白甲基化程度;蛋白質印跡法檢測IGFBP-7蛋白錶達.結果 攜帶D5 Stat5a cDNA的腺病毒感染能夠呈劑量依賴式地促進前列腺癌細胞(DU145及PC3)增殖.如PC3細胞,對照組細胞的相對活細胞數為(1.362±0.018),三箇實驗組相對活細胞數分彆為(1.453±0.022)(P＞ 0.05)、(1.649±0.020)(P＜ 0.05)及(1.829±0.027)(P＜ 0.05).實時定量PCR及蛋白印跡證明D5 Stat5a過錶達明顯下調IGFBP-7的錶達.DU145及PC3對照組細胞IGFBP-7 mRNA相對值分彆為(0.796±0.023)及(0.871±0.046),而感染攜帶D5 Stat5a cDNA的腺病毒(MOI 30)後,其IGFBP-7 mRNA相對值則分彆下降到(0.148±0.019)(P＜ 0.01)及(0.078±0.021)(P＜ 0.01).染色質免疫共沉澱分析(ChIP-Assay)證實,D5 Stat5a導緻IGFBP-7基因啟動子區域組蛋白甲基化(H3K27Me3)水平顯著上升.DU145細胞對照組與實驗組,其沉澱DNA比例分彆為(0.0176±0.0030)％及(0.0650±0.0099)％,兩者差異有高度統計學意義(P＜0.01).此外,實時定量PCR檢測錶明,D5 Stat5a引起組蛋白甲基轉移酶EZH2 mRNA大幅上升.DU145細胞對照組及D5 Stat5a感染組相對mRNA水平分彆為(0.0033±0.0004)及(0.0160±0.0035),兩組比較差異有統計學意義(P＜0.05).結論 轉錄因子D5 Stat5a能夠顯著促進人類前列腺癌細胞的增殖,其主要的錶觀遺傳學機製在于D5 Stat5a增加EZH2基因錶達,導緻抑癌基因IGFBP-7啟動子區域組蛋白甲基化,使啟動子活性降低,IGFBP-7錶達下降,是導緻前列腺癌細胞的異常增殖分子機製之一.
목적 탐토D5 Stat5a대인류전렬선암세포증식적영향급기대이도소양생장인자결합단백7(IGFBP-7)표체적영향.방법 상규배양인전렬선암세포(DU145급PC3),병수궤분위사조:대조조급삼개실험조.대조조이불함외원기인적선병독감염,삼개실험조세포칙이휴대D5 Stat5a cDNA적선병독감염,기병독감염증식활성(MOI)의차위10、20급30.사조세포균재배양액중가입최유소(50 ng/mL)이계동세포신호전도.운용MTS방법검측세포증식;실시정량PCR검측억암기인IGFBP-7급EZH2 mRNA수평;염색질면역공침정기술(ChIP)검측IGFBP-7기인계동자구역조단백갑기화정도;단백질인적법검측IGFBP-7단백표체.결과 휴대D5 Stat5a cDNA적선병독감염능구정제량의뢰식지촉진전렬선암세포(DU145급PC3)증식.여PC3세포,대조조세포적상대활세포수위(1.362±0.018),삼개실험조상대활세포수분별위(1.453±0.022)(P＞ 0.05)、(1.649±0.020)(P＜ 0.05)급(1.829±0.027)(P＜ 0.05).실시정량PCR급단백인적증명D5 Stat5a과표체명현하조IGFBP-7적표체.DU145급PC3대조조세포IGFBP-7 mRNA상대치분별위(0.796±0.023)급(0.871±0.046),이감염휴대D5 Stat5a cDNA적선병독(MOI 30)후,기IGFBP-7 mRNA상대치칙분별하강도(0.148±0.019)(P＜ 0.01)급(0.078±0.021)(P＜ 0.01).염색질면역공침정분석(ChIP-Assay)증실,D5 Stat5a도치IGFBP-7기인계동자구역조단백갑기화(H3K27Me3)수평현저상승.DU145세포대조조여실험조,기침정DNA비례분별위(0.0176±0.0030)％급(0.0650±0.0099)％,량자차이유고도통계학의의(P＜0.01).차외,실시정량PCR검측표명,D5 Stat5a인기조단백갑기전이매EZH2 mRNA대폭상승.DU145세포대조조급D5 Stat5a감염조상대mRNA수평분별위(0.0033±0.0004)급(0.0160±0.0035),량조비교차이유통계학의의(P＜0.05).결론 전록인자D5 Stat5a능구현저촉진인류전렬선암세포적증식,기주요적표관유전학궤제재우D5 Stat5a증가EZH2기인표체,도치억암기인IGFBP-7계동자구역조단백갑기화,사계동자활성강저,IGFBP-7표체하강,시도치전렬선암세포적이상증식분자궤제지일.
