江苏农业学报
江囌農業學報
강소농업학보
JIANGSU JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2015年
2期
279-284
,共6页
韩光杰%赵松%刘琴%李传明%徐健
韓光傑%趙鬆%劉琴%李傳明%徐健
한광걸%조송%류금%리전명%서건
转宿主粘虫颗粒体病毒%增效蛋白质%整合载体
轉宿主粘蟲顆粒體病毒%增效蛋白質%整閤載體
전숙주점충과립체병독%증효단백질%정합재체
Pseudaletia unipuncta granulovirusPs%enhancin%integration vector
为了明确增效蛋白质基因特性,获得重组增效苏云金杆菌,本试验通过生物信息学方法分析了转宿主东方粘虫颗粒体病毒(PuGV-Ps)增效蛋白质基因(En)的特征及二级结构,利用In-fusion技术构建了整合载体.基于PuGV-Ps增效蛋白质基因进化树显示,颗粒体病毒与多角体病毒为2个明显的分支,美洲粘虫颗粒体病毒(PuGV)与转宿主东方粘虫颗粒体病毒的增效蛋白质基因遗传距离极小.6种颗粒体病毒增效蛋白质氨基酸序列比对结果显示,增效蛋白质N端相似性较高,均含有锌离子结构域(244位)与催化域(526 ～ 565位);增效蛋白质基因二级结构中α螺旋和无规则卷曲占整个片段的73％,且N端以不规则卷曲为主;利用改进的In-fusion技术构建整合载体,双酶切结果显示增效蛋白质基因连接方向正确,pLTV1-En构建成功;通过高温整合获得重组工程菌Bt71En.表明,PuGV-Ps与PuGV增效蛋白质基因同源性较高,其二级结构复杂,影响载体构建,通过高温处理连接片段可以明显提高载体的连接效率.
為瞭明確增效蛋白質基因特性,穫得重組增效囌雲金桿菌,本試驗通過生物信息學方法分析瞭轉宿主東方粘蟲顆粒體病毒(PuGV-Ps)增效蛋白質基因(En)的特徵及二級結構,利用In-fusion技術構建瞭整閤載體.基于PuGV-Ps增效蛋白質基因進化樹顯示,顆粒體病毒與多角體病毒為2箇明顯的分支,美洲粘蟲顆粒體病毒(PuGV)與轉宿主東方粘蟲顆粒體病毒的增效蛋白質基因遺傳距離極小.6種顆粒體病毒增效蛋白質氨基痠序列比對結果顯示,增效蛋白質N耑相似性較高,均含有鋅離子結構域(244位)與催化域(526 ～ 565位);增效蛋白質基因二級結構中α螺鏇和無規則捲麯佔整箇片段的73％,且N耑以不規則捲麯為主;利用改進的In-fusion技術構建整閤載體,雙酶切結果顯示增效蛋白質基因連接方嚮正確,pLTV1-En構建成功;通過高溫整閤穫得重組工程菌Bt71En.錶明,PuGV-Ps與PuGV增效蛋白質基因同源性較高,其二級結構複雜,影響載體構建,通過高溫處理連接片段可以明顯提高載體的連接效率.
위료명학증효단백질기인특성,획득중조증효소운금간균,본시험통과생물신식학방법분석료전숙주동방점충과립체병독(PuGV-Ps)증효단백질기인(En)적특정급이급결구,이용In-fusion기술구건료정합재체.기우PuGV-Ps증효단백질기인진화수현시,과립체병독여다각체병독위2개명현적분지,미주점충과립체병독(PuGV)여전숙주동방점충과립체병독적증효단백질기인유전거리겁소.6충과립체병독증효단백질안기산서렬비대결과현시,증효단백질N단상사성교고,균함유자리자결구역(244위)여최화역(526 ～ 565위);증효단백질기인이급결구중α라선화무규칙권곡점정개편단적73％,차N단이불규칙권곡위주;이용개진적In-fusion기술구건정합재체,쌍매절결과현시증효단백질기인련접방향정학,pLTV1-En구건성공;통과고온정합획득중조공정균Bt71En.표명,PuGV-Ps여PuGV증효단백질기인동원성교고,기이급결구복잡,영향재체구건,통과고온처리련접편단가이명현제고재체적련접효솔.
