中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2015年
4期
315-319
,共5页
许艳%陈海丽%刘晓茜%熊延青%席秀红%宰淑蓓%蔡金凤%卢水华%朱召芹
許豔%陳海麗%劉曉茜%熊延青%席秀紅%宰淑蓓%蔡金鳳%盧水華%硃召芹
허염%진해려%류효천%웅연청%석수홍%재숙배%채금봉%로수화%주소근
结核分枝杆菌%CFP10-ESAT6%酶联免疫吸附试验(ELISA)
結覈分枝桿菌%CFP10-ESAT6%酶聯免疫吸附試驗(ELISA)
결핵분지간균%CFP10-ESAT6%매련면역흡부시험(ELISA)
Mycobacterium tuberculosis%CFP10-ESAT6%enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)
目的 制备结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白,探讨CFP10-ESAT6融合蛋白在结核分枝杆菌免疫诊断中的应用价值.方法 PCR扩增得到CFP-10、ESAT6基因片断,将其先后克隆入pET-28a表达载体.优化表达条件、用镍亲和层析的方法纯化带His标签的重组CFP10-ESAT6融合蛋白(rCFP10-ESAT6).制备兔多克隆抗体,建立rCFP10-ESAT6为抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,以健康者血清为对照,检测170例结核患者血清的抗体.结果 重组质粒pET28a-CFP10-ESAT6靶基因测序结果与预计设计完全一致.融合蛋白在E.coli BL21 (DE3)工程菌中均为可溶性表达,表达量占菌体总蛋白的40％.利用金属螯合亲和层析直接纯化重组蛋白,纯度达到95％以上.Western blot分析表明,重组蛋白能与结核患者血清发生特异性免疫结合反应,与健康者血清不发生反应.CFP10-ESAT6的兔多克隆抗体的效价为1∶8 000,CFP10-ESAT6作为包被抗原的检测结核病人血清中特异性抗体的间接ELISA最佳包被浓度为0.002 μg/mL,患者血清的最佳稀释度为1∶500.检测结果与临床诊断的符合率,ELISPOT＞ ELISA(rCFP10-ESAT6)＞ELISA (kit).结论 CFP10-ESAT6融合蛋白具有较高的抗原特异性和免疫反应性,有可能成为结核病免疫学诊断的特异抗原,对结核的诊断具有重要参考价值.
目的 製備結覈分枝桿菌CFP10-ESAT6融閤蛋白,探討CFP10-ESAT6融閤蛋白在結覈分枝桿菌免疫診斷中的應用價值.方法 PCR擴增得到CFP-10、ESAT6基因片斷,將其先後剋隆入pET-28a錶達載體.優化錶達條件、用鎳親和層析的方法純化帶His標籤的重組CFP10-ESAT6融閤蛋白(rCFP10-ESAT6).製備兔多剋隆抗體,建立rCFP10-ESAT6為抗原的酶聯免疫吸附試驗(ELISA)方法,以健康者血清為對照,檢測170例結覈患者血清的抗體.結果 重組質粒pET28a-CFP10-ESAT6靶基因測序結果與預計設計完全一緻.融閤蛋白在E.coli BL21 (DE3)工程菌中均為可溶性錶達,錶達量佔菌體總蛋白的40％.利用金屬螯閤親和層析直接純化重組蛋白,純度達到95％以上.Western blot分析錶明,重組蛋白能與結覈患者血清髮生特異性免疫結閤反應,與健康者血清不髮生反應.CFP10-ESAT6的兔多剋隆抗體的效價為1∶8 000,CFP10-ESAT6作為包被抗原的檢測結覈病人血清中特異性抗體的間接ELISA最佳包被濃度為0.002 μg/mL,患者血清的最佳稀釋度為1∶500.檢測結果與臨床診斷的符閤率,ELISPOT＞ ELISA(rCFP10-ESAT6)＞ELISA (kit).結論 CFP10-ESAT6融閤蛋白具有較高的抗原特異性和免疫反應性,有可能成為結覈病免疫學診斷的特異抗原,對結覈的診斷具有重要參攷價值.
목적 제비결핵분지간균CFP10-ESAT6융합단백,탐토CFP10-ESAT6융합단백재결핵분지간균면역진단중적응용개치.방법 PCR확증득도CFP-10、ESAT6기인편단,장기선후극륭입pET-28a표체재체.우화표체조건、용얼친화층석적방법순화대His표첨적중조CFP10-ESAT6융합단백(rCFP10-ESAT6).제비토다극륭항체,건립rCFP10-ESAT6위항원적매련면역흡부시험(ELISA)방법,이건강자혈청위대조,검측170례결핵환자혈청적항체.결과 중조질립pET28a-CFP10-ESAT6파기인측서결과여예계설계완전일치.융합단백재E.coli BL21 (DE3)공정균중균위가용성표체,표체량점균체총단백적40％.이용금속오합친화층석직접순화중조단백,순도체도95％이상.Western blot분석표명,중조단백능여결핵환자혈청발생특이성면역결합반응,여건강자혈청불발생반응.CFP10-ESAT6적토다극륭항체적효개위1∶8 000,CFP10-ESAT6작위포피항원적검측결핵병인혈청중특이성항체적간접ELISA최가포피농도위0.002 μg/mL,환자혈청적최가희석도위1∶500.검측결과여림상진단적부합솔,ELISPOT＞ ELISA(rCFP10-ESAT6)＞ELISA (kit).결론 CFP10-ESAT6융합단백구유교고적항원특이성화면역반응성,유가능성위결핵병면역학진단적특이항원,대결핵적진단구유중요삼고개치.
