家畜生态学报
傢畜生態學報
가축생태학보
ACTA ECOLOGAE ANIMALIS DOMASTICI
2015年
3期
58-62
,共5页
家兔%脆弱拟杆菌%分离%鉴定
傢兔%脆弱擬桿菌%分離%鑒定
가토%취약의간균%분리%감정
rabbits%Bacteroides fragilis%isolation%identification
脆弱拟杆菌作为严格厌氧菌,对培养环境要求苛刻,分离培养有较大难度.试验通过改进的选择性培养结合特异引物方法分离兔源脆弱拟杆菌,并利用16 s rDNA测序对其进行鉴定,为后续研究其与宿主关系奠定基础.试验从健康青年家兔肠道中采集内容物,先接种于含液态选择性培养基的厌氧管中,进行富集培养1～2 d,然后将培养的菌液稀释后接种到选择性培养基平板上,于厌氧罐中培养1～3 d,待长出菌落后,观察菌落形态,挑选符合脆弱拟杆菌菌落特点的单一菌落,培养后提取DNA,以脆弱拟杆菌特异引物进行PCR检测.对扩增出特异条带的菌株,扩增其16 s rDNA序列,并进行测序,测序结果与GenBank中脆弱拟杆菌序列进行比对,以鉴定分离的菌株.结果表明,细菌为大小不一的杆菌,革兰氏染色呈阴性.特异引物PCR产物电泳检测显示,挑取的27株单一菌落中,有7株可以扩增出符合目的片段大小的产物.随机选取两株进行16s rDNA测序,其序列与GenBank中的递交的脆弱拟杆菌序列相似度大于99％,与其他细菌相似度均小于93.43％,可确定分离到的菌株为脆弱拟杆菌.
脆弱擬桿菌作為嚴格厭氧菌,對培養環境要求苛刻,分離培養有較大難度.試驗通過改進的選擇性培養結閤特異引物方法分離兔源脆弱擬桿菌,併利用16 s rDNA測序對其進行鑒定,為後續研究其與宿主關繫奠定基礎.試驗從健康青年傢兔腸道中採集內容物,先接種于含液態選擇性培養基的厭氧管中,進行富集培養1～2 d,然後將培養的菌液稀釋後接種到選擇性培養基平闆上,于厭氧罐中培養1～3 d,待長齣菌落後,觀察菌落形態,挑選符閤脆弱擬桿菌菌落特點的單一菌落,培養後提取DNA,以脆弱擬桿菌特異引物進行PCR檢測.對擴增齣特異條帶的菌株,擴增其16 s rDNA序列,併進行測序,測序結果與GenBank中脆弱擬桿菌序列進行比對,以鑒定分離的菌株.結果錶明,細菌為大小不一的桿菌,革蘭氏染色呈陰性.特異引物PCR產物電泳檢測顯示,挑取的27株單一菌落中,有7株可以擴增齣符閤目的片段大小的產物.隨機選取兩株進行16s rDNA測序,其序列與GenBank中的遞交的脆弱擬桿菌序列相似度大于99％,與其他細菌相似度均小于93.43％,可確定分離到的菌株為脆弱擬桿菌.
취약의간균작위엄격염양균,대배양배경요구가각,분리배양유교대난도.시험통과개진적선택성배양결합특이인물방법분리토원취약의간균,병이용16 s rDNA측서대기진행감정,위후속연구기여숙주관계전정기출.시험종건강청년가토장도중채집내용물,선접충우함액태선택성배양기적염양관중,진행부집배양1～2 d,연후장배양적균액희석후접충도선택성배양기평판상,우염양관중배양1～3 d,대장출균락후,관찰균락형태,도선부합취약의간균균락특점적단일균락,배양후제취DNA,이취약의간균특이인물진행PCR검측.대확증출특이조대적균주,확증기16 s rDNA서렬,병진행측서,측서결과여GenBank중취약의간균서렬진행비대,이감정분리적균주.결과표명,세균위대소불일적간균,혁란씨염색정음성.특이인물PCR산물전영검측현시,도취적27주단일균락중,유7주가이확증출부합목적편단대소적산물.수궤선취량주진행16s rDNA측서,기서렬여GenBank중적체교적취약의간균서렬상사도대우99％,여기타세균상사도균소우93.43％,가학정분리도적균주위취약의간균.
